骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导（转贴精华）

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骨髓间充质干细胞向肝细胞诱导方案是什么，哪位大侠帮忙一下。
( v6 X7 A5 t0 t/ e3 m- s1 }谢谢。8 I! [7 B% u5 G0 K! c

6 w$ P* h( s& I本贴回复转贴自dxy的精华贴

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1.常用的体外诱导方法是在体外培养的成体干细胞中加人入诱导因子。诱导因子包括各种能影响细胞分化的物质，如血清、糖分、维生素、以及各种蛋白因子等。
& r+ M5 {3 ~; {& n* @4 W2.日本学者Oh等首先报道，高浓度肝细胞生长因子(HGF)体外诱导大鼠骨髓细胞分化为肝细胞，并表达CK8, CK18, ALB等。
6 M# q$ u3 [3 j, p4 g5 k3 h  f( Y3.2002年，Schwartz等将大鼠、小鼠和人的多能成体前体细胞(MAPC)接种到铺有基质明胶或纤维连结素的培养瓶中，用60％DMEM(低糖型)+ 2% FCS培养体系培养，并加入HGF和/或成纤维细胞生长因子-4(FGF-4)，在培养的第7天，MAPC分化为表达肝细胞核因子-3BETA,GATA-4 ,CK-19和AFP的上皮样细胞，在第14-28天，这些上皮样细胞表达CK-18, HNF-4和HNF-1 alfa。大约在第21天，CK-18和ALB染色阳性。这些上皮样细胞也具有肝细胞功能特征:分泌尿素和白蛋白，能摄取低密度脂蛋白并贮存糖原。
1 v7 k- P- \' j; U3 x4.结果表明，用HGF和FGF-4在体外能将MAPC诱导分化成具有形态、表型和功能特征的肝细胞。实验表明，FGF-4单用可诱导肝细胞分化，用HGF处理的细胞分化程度更高。

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查过一些文献，诱导方案不一，大是大都是HGF,FGF,EGF这三种主要成分，加入的量和时间不同，有人设计出一种cocktail的诱导方案，也有人直接将所有因子加入诱导，真是不知道怎样评价那种方案好，哪种不好。6 H& T! Q5 p7 i6 Z( X: A# O" V0 P
附上1篇文献关于诱导的。不知道为什么老说文件不存在。

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昨天试用了一种诱导方案诱导（向肝细胞），今天去看，细胞死了70％，全部悬浮起来，自己一想，MSC在变为肝细胞时需要时间，此时将适合MSC的DMEM换成适合肝细胞生长的诱导培养基应该是对MSC有影响的，应该采取逐步替代换液可能会好点，可是这种方法是别人用过的成功的方法，为什么他们就没有出现过这种情况，还是本身方法没问题，是我的实验出了问题呢？

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1.请问您的MSCs是培养多长时间的，您什么时候换成肝细胞诱导液进行培养的  P- w( z# }  y- S1 K$ r( E# Z" g7 {# I7 X
2.一般说来，培养3-5代，待细胞融合80％左右，细胞活性很好，此时添加诱导剂较好: ^' `2 d8 J6 m# c: O& }
3.诱导液的配制方法，已经诱导液的pH，pH值直接关系到细胞的存亡，一般说来，无菌基本不是问题
" X9 h) w7 h) K8 s& _4.一般无需逐步替代换液
9 m* Q6 E2 u1 @! ~2 H+ x5.应该不是您方法的问题，能把您诱导的具体方法发上来一起研究就可以更好的找出原因了，试验要尽量注意小细节问题！1 a* m+ ]2 R9 x# g: e; u5 I* g
祝你好运！

chailh

我使用HGF20ng/ml，EGF10ng/ml联合诱导，10％FBS（Gibico特级胎牛血清），24小时后，一半细胞漂浮，48小时细胞死掉大半，镜下几乎不见典型贴壁细胞，真是心痛。
+ I; h( @6 Z" n) P5 P疑问：
- z! |4 p9 b$ l+ I2 g5 L4 i1、细胞活性不好？
* _3 M- e$ \. c) t$ E1 x2 `代数是第4代，诱导前感觉形态尚可，密度为约70％0 D7 i1 Z2 G/ l' r+ I3 l
有人认为，诱导需要低营养、高细胞密度的条件，不知对不对？？; e7 d# E8 X7 u) L
2、诱导方案有问题？
9 g! C4 z% _) j# K' O1 G# |- ]各位有没有什么推荐？感觉上，很多国内文献的因子诱导方案似乎有待考证* ~6 g  J5 R; p( l9 o- x
初生牛犊，期待各位前辈的指点！5 x/ i# u/ T. f: z2 ]* n
图片我迟些时候上传上来。

chailh

1.您的细胞活性应该不是大问题，可能出在诱导培养液上
9 F" v, A3 g& d0 o6 {# d, c2.诱导需要低营养、高细胞密度的条件，有一定的依据，很多人也是这样做得，效果还不错
. [8 G7 p6 C( A, Y: J! Q9 [( h3.诱导液的pH值有一定的要求，一般要在7.2-7.4之间，配好溶液时测定，然后过滤除菌，最后取一部分加相应的因子就行了，4℃下保存的培养液保存最好不要1个月9 ?% w3 v% k" |) f  Z5 @4 W1 ]
4.您的诱导方案上基本没什么大问题，再试试吧

chailh

谢谢xn8476！3 W0 i2 ?! `- c& s0 z- B+ F  H
我用的HGF/EGF储存液错误放在4度冰箱一月余，会不会跟这个有关阿，痛苦啊，一千多的东西，一时错失就.......呜呜
% _$ t+ S, v- h7 p. A今天观察细胞：诱导第4天，细胞稀稀落落的，没有明显增多，宽大、分支多，还见到很多串珠、片状圆形 半透亮的东西，是不是感染支原体之类？图片还要等几天啊，拍照和培养不同地方。

chailh

我用的方案是：
3 t2 Y8 o; ]( |1 取第五代90％融合细胞2 U: {  N) Z8 o/ s
2诱导培养基：HeptoZYMEZ－SFM＋HGF 20ng/ml+FGF-4 20ng/ml+EGF 20ng/ml
2 X5 s, e7 e- T6 v8 w诱导24小时，细胞死了70％，48小时死的七七八八。' X/ @% `: d7 p& d) Q. v
可是师兄做出来很好的，不知道什么原因。

chailh

请问ctyw7081 m% s, m% T, p7 o4 x
您是在原先的基础培养基－－DMEM上加入诱导因子吗？