CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

回复 lybai 的帖子
) z9 a) s0 S) @5 W: p
: h# K( k1 L9 u' {可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

回复 lyj-0017 的帖子1 A  M. z  F1 X0 m1 l! Y
( P! U( A% B# k/ J1 c# t* u
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。
6 \3 Y/ ?$ v# p- S" L" e第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，
, H& R8 s! {8 |/ `% F2 ]4 c5 [0 j第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
" s; l1 H$ Y) p第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2
. p" z9 M# k1 z9 A8 n  X第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.3 A% b- ~9 I0 C) K
第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2
2 b# p+ l, s# ~* |) U" \) O' @第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

回复 阿秀哥 的帖子
# `5 M& {1 u( R" `' T' f. ^) G/ S3 x7 `' L/ H
谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

回复 wzs1985 的帖子
# r/ B: C# V/ {& S4 n
. c: b( k2 e2 H6 @/ Q- S这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？
7 S2 f- G' g# j

lyj-0017

回复 lybai 的帖子
9 H! l) W7 Z/ w# [
, U6 f6 k9 c. H因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。