CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

阿秀哥

我们IL-2是1000U/ml，效果还行，楼主可以试试，仅供参考，希望对你有用

lyj-0017

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4 @- ]1 w# A( s! R+ W$ Z, ?9 y4 Q1 ^. }( a  T6 W0 p- u: M
可以把你大体的操作流程发一下让大家帮你分析一下，单纯这样说看不出为啥数量级达不到的原因。

lybai

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5 o, v# Y6 v  @0 Z$ M  g9 r9 p. H
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。+ _- H6 V% c* o- i- a! B
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，
' H: U8 \7 a: |8 |. }: d第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
) B( H5 Z- |# ?  N# \8 n8 T第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-25 Y1 q& S# s- K5 j# a$ O: {0 p/ z& w
第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.
; l- K5 P# U' K0 P# w第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2' G5 H% J  ]2 G0 R5 E
第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

rzghc

新因子可以做一下不同因子浓度的预实验，确定最佳范围

lybai

回复 阿秀哥 的帖子8 j! t- Z! e9 I' h
. O2 ]6 P3 @  Z8 G$ ]/ l% O
谢谢您提供经验。

wzs1985

各种因子的活力是一种ED50的即半价有效量。各个公司的因子活力不同，有个半价有效量是1ng/ml，而有的可能是0.2ng/ml。所以你要根据这个半价有效量来调整你所添加的因子浓度。

lybai

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& H- r: @$ H/ x6 K$ @, H* s
' {0 {/ s" P, e) M) S. p3 \这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？- `: N- b. l+ ~' s5 b& w, }9 {

lyj-0017

回复 lybai 的帖子) r) i3 d' @; I4 Z% ~6 ~

, y6 Y) A# D9 A, ?; b4 o因子浓度没啥问题，第三天补液太多了，细胞还没开始大量扩增你就稀释一倍。