CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

Ivan0108

1、个人认为不需要用重量单位来计算加入量。最好是购买国产因子时问清楚活性是多少，按照进口因子的活性值，通过活性值反过来推算国产因子加入重量。
5 j. M* B( s* @8 L2、看你的因子培养基加入，有点问题。 CIK细胞需要诱导激活期密度大一点。所以你第0天20ml血分离的PBMC接种25ml培养基肯定多了点 建议改成10-15ml。

lybai

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0 M$ `- x+ N+ w! a8 o/ h2 R+ m6 I3 P) m# _. G7 a( E
接种密度需要控制在多少比较合适？还有一个不太明白，伽马干扰素和IL-2加入时都是按照活性单位来计算加入量，为什么CD3单抗却是按浓度单位ng/ml算加入量。

孤独山石

楼主的因子浓度差不多没啥大问题 。我个人觉得您前期补液太少了，这个CIK第三天后高速扩增，1：1补液根本不够，不知道您有没有注意补完液第二天培养液是不是已经变黄，培养液营养不足，PH偏酸可能是导致您细胞数量级不够的原因。个人建议前10天控制补液后细胞浓度0.5-1*10的6次方，这样细胞扩增较多，活性也较高。

wzs1985

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: N* H- d( I3 S6 T. a# N
9 j% `2 z4 S  m# X1 rED50不用自己测定的，一般进口因子都是有标注。就像thermo的ED50都是一个范围值https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10704H02H50?ICID=search-product。所以你说不定要变动下添加的浓度。
, w5 h; m- d- C; d另外，il-2已经出了国产药品，可以直接购买。
- O- W8 B5 Y; g6 j( D# \: aGibco AIM-V虽然是无血清培养基，估计还得的少量加些。

淘知路遥

个人感觉接种密度少了，20ml血液提取的细胞加了25ml培养液，下次可以增加血量50-60ml，或者改用T75瓶培养，同时培养液减半

淘知路遥

回复 lybai 的帖子1 T1 }! Q* e! d' @6 \1 L; C' z" J7 M
: I* j) r! d- j, a6 H( T9 a
说明书有ED50,和换算单位的，看你用什么液体稀释的

剡溪兰客

自己摸一下条件，浓度太高会提早凋亡的，大概7天左右

baoweih

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( |! L" K4 ?  j
, s4 P% l+ A9 X1 D你好，能问下CD3是怎么加的吗？你说CD3浓度是50ng/ml,第一天加CD3，是按你接种25ML的量来配成50ng/m吗？谢谢

lybai

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$ @  }( y' m4 f+ b7 O
# q+ E$ [3 S9 p+ _$ G, d0 j% S是的，终浓度是50ng/ml

baoweih

回复 lybai 的帖子+ M8 M6 Z# a$ I" V* G' D4 G( z2 h
* K- h3 C1 m% L; t" O
是加这一次吗，后面的培养不用加了吧。我这是用10ML培养基包瓶加20UL的因子，我知那是CD3，但不知道浓度