CIK培养时，国产细胞因子浓度要增加么？

lybai

目前我们做CIK培养时，用的国产细胞因子，干扰素为1000U/ml,   OKT3为50ng/ml.   IL-2为500U/ml, 效果不好，数量级达不到，请问国产因子浓度需要加大么？

lybai

回复 lyj-0017 的帖子+ S9 W8 L2 N4 c2 C0 S- X; Z% q
' }: ^' }* ]: j2 u) Z  j
抽了20ml正常人的血，分离出PBMC，分完能看到明显红细胞。8 [+ c) S( V* ^; k
第0天：接种浓度1.1*10的6次方/ml, 用Gibco AIM-V培养基25ml，接种时加入了伽马干扰素，
6 ?  P3 E" ~6 ^3 O8 E% |第1天加入CD3，IL-2，浓度如第一个帖子，
0 _0 X* ~+ B" \$ `$ m/ M第3天，培养基颜色变化不大，计数为3*10的6次方，补液25ml,添加IL-2
! t& K# A2 x& v. A) p4 w  A第8天，培养基颜色变黄，计数3.7*10的6次方，补液50ml,添加IL-2.+ R% r  p9 t" Y. Y% {4 d
第10天，颜色稍微变黄，计数6*10的6次方，补液100ml,添加IL-2
0 Z3 r, ^+ T$ C. c第13天，培养液颜色没什么变化，计数1.8*10的6次方，

lybai

第0天还加入了1%的自体灭火血浆，忘记说了

lybai

回复 阿秀哥 的帖子% ~$ t* }8 m0 I

9 _% k2 {7 a5 U* h谢谢您提供经验。

lybai

回复 wzs1985 的帖子
" M2 K. L2 ?1 a- x* d8 ?, u1 I6 j$ M# o& w) D
这个ED50需要自己测吗？没看到购买的CD3单抗上有标注ED50，其它因子直接标注了活性如10*7IU/mg,培养时，我看只有CD3单抗用的单位是ng/ml,其它都是活性单位IU/ml,这个已经是活性单位了，还要换算么？
, j7 m. B. M4 u; _' T4 a/ n

lybai

回复 Ivan0108 的帖子
- L8 ?  X0 e* H9 F
1 I7 H6 r1 ?  L接种密度需要控制在多少比较合适？还有一个不太明白，伽马干扰素和IL-2加入时都是按照活性单位来计算加入量，为什么CD3单抗却是按浓度单位ng/ml算加入量。

lybai

回复 baoweih 的帖子
# }/ h7 n* a  z6 o1 J
9 ?9 h1 g: H. M是的，终浓度是50ng/ml

lybai

回复 baoweih 的帖子
+ K/ u/ i& }5 |- s' B
( J1 |+ p6 A7 C4 C3 |3 X0 n包被一般就不用加游离的了，