请问造血集落培养的相关问题

ye1018

求助：造血集落培养时应注意什么，琼脂和甲纤那个好些，我做染色怎么做

玉米卡

培养液PH.7.0-7.2为好& `( l3 A& j8 j0 \4 k
血清.马血清.牛血清.人血清.培养造血祖细胞以健康马血清为好.切忌使用蛋白沉淀物质的血清8 R0 ]3 T: S, g, j8 E* u, H1 u
刺激因子要严格遵守各类刺激因子的制作程序: L2 Q% G. ]2 K, j( A
支持物.包括琼脂和甲纤及血浆凝块等.要注意浓度的控制和加入支持物时的操作手法.( V  I4 }" V1 g- C% D5 Q
温度湿度及CO2要恒定.1 o) t! Q! F  q0 e+ H2 i8 m. y+ s8 p
最好做预实验.检测培养液.刺激因子.琼脂及器皿等是否合格.

玉米卡

一般培养CFU-GM采用琼脂半固体培养方法
& |) W5 c/ c1 [培养CFU-E/BFU-E/CUF-Meg/CFU-Mix采用甲纤培养体系!& g, Z7 @4 J* d" j2 u$ S) U
具体要求实在内容太多!要写一本书了!
6 P  A9 L2 ?2 T5 |& L1 v4 Z' G染色方法也是一样!
0 ?1 M! }; p5 I4 v3 F# D: M5 y3 r3 v具体看你要作什么!你的问题太笼统!不好回答!, V5 z# E: J8 \0 J, i7 Z3 x2 E: T+ u
祝你好运!

wuweitmc

一看就知道是新手，我来说说，我做了一年的集落培养。
. J- ^' N4 k& s, x% D' X  v造血集落的培养也叫半固体培养，常见的有甲纤、琼脂和血凝块培养。各有所长，甲纤培养可以一劳永逸，使用时拿来就能用很方便；而琼脂就不那么方便了，现用现溶，并且操作时要眼疾手快，否则前功尽弃；你如果做琼脂培养我再给你详细说说，到时联系我。并且做HPP-CFC时，用琼脂培养容易些，虽然文献报道可用甲纤培养，但我没能培养出。: k2 R" l% s: a
培养时注意的问题很多，我在前些时候也说过，在重复一下，归纳起来有如下几点：1.做甲纤培养，混匀时动作轻柔，避免起泡，起泡后影响集落形成；另外甲纤一定最后加入。9 E3 k1 c9 t# w( R
2.种完体系后，别忘了，在孔周围加点无菌蒸馏水，防止培养过程体系水分丢失，水分丢失体系易干影响集落形成，因为培养集落时间一般在7天左右，甚至21天，mCFU-GM 7d,hCFU-GM 14d,CFU-E 3d ,BFU-E 14d CFU-GEMM 14d ,HPP-CFC 21d.& w. I5 ~! D" |5 D( y* p! a  k* n) a
3.培养HPP-CFC要用琼脂来做。我用甲纤做过，不长HPP-CFC，反而长CFU-GEMM，同样体系用琼脂做，可获得HPP-CFC，做BFU-E,CFU-E时，甲纤做的很好，集落很漂亮。琼脂做集落关键掌握手法，琼脂不能太热，太热细胞易被烫死，太凉不凝，加时边加边摇匀。- k( u& E+ g' g7 s. B& l
4.血清的选择也很重要，有的血清适合做红系，有的适合做粒系，所以首先要知道你要做什么集落，选择适合的血清。 1 {' y: D- g" Z7 M0 C- N: B$ i
染色，你说的太笼统了，集落染色有很多种，例如：吉姆萨，瑞士－吉姆萨，联苯胺染色。最近我做了瑞士－吉姆萨染色，原位的话，首先挑出集落于波片上，然后用醋酸纤维薄膜压片，然后甲醇固定，再染色，染色5分钟，可以立即观察，也可封片以后再看。

lyj-0017

4# wuweitmc
' A$ v3 `: Z4 _. z% B1 m: P6 T3 E7 u
. O6 g, w$ _' [8 e# U
这位大哥怎么联系，我现在就是要做集落的培养，想多向你请教一下如何操作，能否留个联系方式那？

C_H_Yuen

回复 4# wuweitmc 5 D7 Z' }7 E0 E5 m* b0 ~+ y2 f: \! x

0 |1 |* l- T/ Z9 l+ d4 l0 z; R  p" r) Q: `, F
    有没有造血干细胞的镜下图片？？

农夫有点田

回复 wuweitmc 的帖子
2 S0 O' V4 R. J) K" a
, m5 w" m: O8 h& a3 K6 {您好厉害 得多多向您学习
9 |$ |2 p, T7 e# A

verakiww

回复 wuweitmc 的帖子
% f& K& W& q: q
8 f, \  Q2 Q+ a- ]3 A" ?! B5 e你好 我看了你的造血干细胞集落培养的回复 很想加你qq向你请教 可以吗 万分感谢！我的qq357894999  希望你可以方便加我 谢谢啦

细胞海洋

回复 verakiww 的帖子
3 t% x: P, \; m$ _, C; [! ^9 G8 L. }& r" D( H- w
有问题直接在论坛发帖吧