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成体NSCs原代消化酶的问题 [复制链接]

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楼主
发表于 2017-5-12 17:25 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印
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本帖最后由 cloud100 于 2017-5-12 17:25 编辑 % S2 ]( h" L0 H, `* h

4 T. A0 e6 S: |4 P# _+ b0 \9 n7 ~' ]9 F2 i8 g
我现在养成体NSCs,如图所示,取3月龄大鼠的SVZ和DG取脑组织(可能范围略宽一点),剪碎成约1mm3大小组织块,
- b& o; B( F1 j& r1 ]# `( T6 f. e& i4 d- X用3ml Hank’s液+2.5mg/ml胰酶(gibico)+15mg/ml 木瓜酶(solabio)+2.5mg/ml 2型胶原酶(merk)+0.2mg/ml Dnase(solabio)+0.02%EDTA,2 }: T- I* j8 V0 P( B
37℃消化 30min,发现组织块消化效果很差,基本上看不出组织块有减少的迹象,经过吹打后,依然有大量组织块,消化得到的细胞也很少。
- a* F2 j% X# g4 v" J* X6 j: T
8 e; _( p0 ~2 w5 l我这个酶浓度是反复试验、不断加量到这个剂量的,已经比文献超出了许多倍,但每次都无法取得良好的消化效果。9 o% Y8 ^2 C5 c6 o' r; U
以前养神经元,取新生鼠皮层,1.25mg/ml的胰酶,15分钟,组织块很快就彻底消化干净了,怎么成年鼠的脑组织这么难消化?0 a: ?9 G7 y) p! q& w* m. H: D

7 \# J( m$ ^: _: L/ z; j1 V请教各位老师,有没有养成体NSCs的经验可以指教的?谢谢。' z9 a% u: h, V0 `9 `; f
  g. H# `' [. F1 B5 N
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沙发
发表于 2017-5-13 08:03 |显示全部帖子
消化酶都是现配现用,质量应该不存在问题,胰酶每次拿来传代效果都很好。。胶原酶和木瓜酶都是新买的。
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