为什么细胞传代后莫名其妙的不贴壁

fenglinzhu

同事培养的骨髓干细胞，传代之前长得好好的，传代后第二天观察细胞贴壁量少，大量细胞悬浮，而且形态状态不佳。换液后无漂浮细胞，等第二次换液前观察又有大量漂浮细胞，同时贴壁细胞缓慢减少。一开始以为是他消化过头导致细胞活力差，换人操作后还是会出现这样的状况。不知有没有大神遇到过这样的情况，求帮忙！
. ]/ [- t' X6 E- p: }注：1、培养基清澈，且无菌检测阴性，不像污染。/ \1 a  `+ J, G, J7 Y" H3 ^( b  B
       2、胰酶0.05%，消化时长30s-2min，细胞变圆皱缩时终止消化。

wangddk

是不是工艺哪块出错了？或者试剂的量有差异？

niliu730323143

如果其他找不到问题，建议更换消化酶，采用胶原酶或者ACCUTASE消化。

baby00000003

回复 fenglinzhu 的帖子
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6 n! y3 ?- r, S1 D& Y- K9 m我去～有这种规律呀......那你就认真看一次他的操作全程，看他有什么“特殊习惯”呗～～

rzghc

回复 fenglinzhu 的帖子1 Y* ]/ y. T' u4 O: ]% h

/ W( W$ s4 e- @你同事是不是操作不规范啊，划瓶子了？

fenglinzhu

回复 baby00000003 的帖子
0 [' ?4 Z4 x; z1 Z9 _- ^9 a; i2 f2 G7 n5 E4 V! |# _4 l
我一开始的时候怀疑是消化过度，因为只有那个同事操作的时候发生这样的情况比较多，其他人出现类似情况的次数很少很少，不过又觉得不像消化过度，30S-2MIN时间也不长啊。

baby00000003

回复 fenglinzhu 的帖子0 Z% u' \* @1 b4 x" p; b+ n, u& s
& @1 h- b+ U( ~0 Z: O: a  g
那就不好猜了，是不是放在了培养箱里特殊的位置......要不就是不小心被紫外照了之类的....

fenglinzhu

回复 qinchuanniu 的帖子
, S$ c" b4 s! ?6 R/ J
, `" I! O/ a. D只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。10%的FBS个人觉得不低了，而且我感觉细胞还是在增长，只是不贴壁了。

fenglinzhu

回复 理科小文艺 的帖子: \9 Z  l* p' c2 x- x5 ^* i6 i

. H1 ]( K$ j) i  V/ V只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。培养基也没有变动。

fenglinzhu

回复 rzghc 的帖子, `' _1 x7 M8 Z
% T* K9 u4 s6 r0 P  \9 P) f% V( N0 H! ~
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。如果是支原体污染，那不应该大部分会是这样吗？