为什么细胞传代后莫名其妙的不贴壁

fenglinzhu

同事培养的骨髓干细胞，传代之前长得好好的，传代后第二天观察细胞贴壁量少，大量细胞悬浮，而且形态状态不佳。换液后无漂浮细胞，等第二次换液前观察又有大量漂浮细胞，同时贴壁细胞缓慢减少。一开始以为是他消化过头导致细胞活力差，换人操作后还是会出现这样的状况。不知有没有大神遇到过这样的情况，求帮忙！
) G) Y. X+ v* t注：1、培养基清澈，且无菌检测阴性，不像污染。
- K; w' N2 z! M+ W1 y  O       2、胰酶0.05%，消化时长30s-2min，细胞变圆皱缩时终止消化。

qinchuanniu

培养液原因：你用的是是无血清还是有血清培养液，这次是否更换过，如果你的细胞不用于人体内治疗，可适当提高培养液血清浓度；培养皿（瓶）的原因：有些品牌的质量不稳定，会影响细胞贴壁，可以用多聚赖氨酸、白蛋白溶液或适当浓度的血清处理一下。

理科小文艺

1.培养液成分是否有变动？3 h$ X; ~! Y( E4 K: \) G
2.培养箱参数监测是否有问题？
! V7 \$ ]* f) J$ d0 k! {* A8 b3.是否进行了支原体检测？% J* ~- f7 i# {1 w$ m
4.培养瓶确定是贴壁细胞用？

rzghc

建议你测一下支原体。

baby00000003

0 b6 O3 u8 G1 v+ J& i- ?  {, }

8 u2 w4 N6 f9 C; M4 s# h从试剂到设备，整个流程查一遍* A% i" K, ]8 [. F
比如，配液配方、耗材货号、离心机参数、培养箱参数......& M1 ]7 M5 O# C. E: f0 q

7 r( x( r; o! t  p* W: w如果连续培养几天都有漂浮的细胞，直觉上是培养基配方的问题

fenglinzhu

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0 Q7 V% }4 a) Y; h% u) T. N/ ~$ |
5 U; D0 Y3 n0 j% ]' ^! c; g( \3 g只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。

fenglinzhu

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  G: z6 H4 V' a# i: t# D
: u+ V8 ?3 o5 ~0 |- w) G只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。如果是支原体污染，那不应该大部分会是这样吗？

fenglinzhu

回复 理科小文艺 的帖子0 `1 ]1 P! e0 R1 v9 n- i0 Q7 J  K
5 I7 H' b3 M8 Y2 G
只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。培养基也没有变动。

fenglinzhu

回复 qinchuanniu 的帖子) u0 x# E* n3 o) _$ H5 |, Y

9 K, v) d2 j: W只有少数一两皿传代前生长良好，传代后不贴壁。大部分细胞传代后都是正常生长的。10%的FBS个人觉得不低了，而且我感觉细胞还是在增长，只是不贴壁了。

baby00000003

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4 k! X; X/ p8 m, J' L' B: v3 F/ K6 D& Y1 G' k5 E: f
那就不好猜了，是不是放在了培养箱里特殊的位置......要不就是不小心被紫外照了之类的....