分离脐带间充质干细胞，收标本问题

jiandie

第一次用含2%双抗PBS收的脐带，常温，瓶盖是拧紧的，约2小时后处理，解剖3-4h，采用贴壁法，15天后出细胞。/ ]& \6 m% ~4 @
第二次含2%双抗PBS，冰浴，瓶盖未拧紧，约4h处理，解剖4h，贴壁法未出细胞。4 D. n2 z. i7 K4 W+ a
请问以上步骤哪些有问题，收集脐带标本时注意什么？

uslzhang

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看不出二者的操作有什么问题，也未必是“收标本问题”，有的脐带本身就难以出细胞。

jiandie

回复 uslzhang 的帖子3 Y  `% ]4 N7 s- D5 G; W# \! H  j) B$ m

& i0 z9 w+ T6 ]# i) d4 W8 [) ?第二次脐带是较第一次细。。瓶盖拧紧时间长会造成细胞缺氧吧。。

zuishui

请问两次细胞都贴壁贴上了么？

伊诺强

应该是处理方法有问题！很少遇到MSC养不出来！如果不能保障脐带采集环境无菌的话，可以先用酒精快速 清洗脐带表面，然后去除两端，原带培养可以添加双抗。另外你的处理时间有点太长！

444352110@qq

个人认为，瓶盖拧紧不拧紧关系不大，最好是尽快处理，同时脐带也可能会有差异，有可能有不长的，具体的还要看你的操作。

fm001982

首先，采集的脐带质量很重要，是否健康，是否有破损。
" |# ^9 ^6 T  `7 r* P其次，保存的温度在4到22度都行，一般来说放4度冰箱就可以了。室温的话，别太热太冷，放几个小时都没问题。9 n! L* I3 v* o
再次，放置的时间，3天以内都能过细胞，更久的没做过，估计也行。
4 i+ L6 I  W& t% K0 O然后，分离的方法要自己把握，也会影响结果（如贴壁的方式、分布数量等），但每根3到4小时的分离时间是否太太太太长？
  l' V: I/ j; y; ^3 \最后，培养的条件，特别是培养液也会影响爬出的时间。+ F# S2 l' l9 ?  ]0 }4 R/ k* |7 |
总之，很多因素会影响，收集脐带只是很小的部分因素，这方面只需要注意健康完整、无菌和放置条件，整体实验的话，你还需要多方面综合考虑。

理科小文艺

回复 jiandie 的帖子3 y& b: v% p+ b4 h6 x* U  J1 l- o2 K
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不拧紧？那你的细胞还能用吗？污染概率忒大了。和瓶盖拧紧没关系。我们巴不得越紧越好呢。  @' s" I$ b" d( r9 v

jiandie

回复 zuishui 的帖子! ]6 G6 u# C  Y
' c. Y0 q- z8 E
第一次出细胞贴壁，第二次没出细胞。。

jiandie

回复 伊诺强 的帖子
8 `7 i3 `; s7 b" h+ h& i. G$ u  }) P( a  u: q% y- R9 s! P
谢谢