分离脐带间充质干细胞，收标本问题

jiandie

第一次用含2%双抗PBS收的脐带，常温，瓶盖是拧紧的，约2小时后处理，解剖3-4h，采用贴壁法，15天后出细胞。5 \3 ?1 U% j7 p( m$ L
第二次含2%双抗PBS，冰浴，瓶盖未拧紧，约4h处理，解剖4h，贴壁法未出细胞。
* F, w1 b' s* I; J" ^3 w1 n( [请问以上步骤哪些有问题，收集脐带标本时注意什么？

uslzhang

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' H' a! O$ m: c5 q8 H- A  \6 T7 D8 C: _
看不出二者的操作有什么问题，也未必是“收标本问题”，有的脐带本身就难以出细胞。

jiandie

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+ Y9 `- U0 |- |  Z& x/ D' z7 N
3 [& h! ?5 b$ G+ Y. D第二次脐带是较第一次细。。瓶盖拧紧时间长会造成细胞缺氧吧。。

zuishui

请问两次细胞都贴壁贴上了么？

伊诺强

应该是处理方法有问题！很少遇到MSC养不出来！如果不能保障脐带采集环境无菌的话，可以先用酒精快速 清洗脐带表面，然后去除两端，原带培养可以添加双抗。另外你的处理时间有点太长！

444352110@qq

个人认为，瓶盖拧紧不拧紧关系不大，最好是尽快处理，同时脐带也可能会有差异，有可能有不长的，具体的还要看你的操作。

fm001982

首先，采集的脐带质量很重要，是否健康，是否有破损。
# _. q8 d2 P2 S  }( V其次，保存的温度在4到22度都行，一般来说放4度冰箱就可以了。室温的话，别太热太冷，放几个小时都没问题。
) f+ D  M: \$ _- O再次，放置的时间，3天以内都能过细胞，更久的没做过，估计也行。1 R$ j. Q" h+ x$ i% [
然后，分离的方法要自己把握，也会影响结果（如贴壁的方式、分布数量等），但每根3到4小时的分离时间是否太太太太长？1 B* H, N+ w; t; k" r4 ~  p" I
最后，培养的条件，特别是培养液也会影响爬出的时间。+ d  m1 L5 y: b' a% L
总之，很多因素会影响，收集脐带只是很小的部分因素，这方面只需要注意健康完整、无菌和放置条件，整体实验的话，你还需要多方面综合考虑。

理科小文艺

回复 jiandie 的帖子! K7 p) E5 ?4 }6 R0 h0 j% A, I% E

7 w3 A5 k3 I  J' n* l3 Q不拧紧？那你的细胞还能用吗？污染概率忒大了。和瓶盖拧紧没关系。我们巴不得越紧越好呢。" V8 f2 Q( _+ X/ p. L1 H0 D5 U

jiandie

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) p' j) W. E0 D5 ]' G
# I: ?7 D5 |, T0 n$ {0 a3 N第一次出细胞贴壁，第二次没出细胞。。

jiandie

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1 s% a1 @. D. Y* J5 e; R
4 t# P9 l& l5 m谢谢