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以下是本人在综合园子里的各方经验，阅读Sigma的说明书，考虑实际操作需要上总结的。注意各个文献所使用的试剂的实际浓度有出入和计算单位有不同，另注意溶剂的浓度和对实验的影响。9 x9 o: Z4 l% M0 W
! w r" k& o5 G$ |# k3 W
材料：DMSO 2N盐酸（此时大多数人的答案，N 是 克当量) 无水乙醇 3 b; d( C I) ]. k1 `) T
消毒好的1毫升EP管 微量加样器 消毒好的小青瓶 B0 @6 Y% N. K
消毒好的一次性小滤器，有机系滤膜（消毒前放入滤器一起高压消毒，本人使用尼龙膜），也可以购买一次性的有机系小滤器% J- M+ x7 V/ k
一次性5毫升注射器 电子天平
* M2 T, C1 C; ` c' k) X
4 `2 [. N2 E* U& L' O0 I5 A胰岛素干粉： 2mg加1ml水(盐酸调节水为PH 2.0)( 此为说明书所写），保存温度：-20度。+ }! _7 G4 E6 u! X [
1.10mg溶于5ml pH2.0的盐酸溶液，浓度为2mg/ml。过滤。. `- e2 f9 h2 R1 h
2.分为20份，每份0.25ml含0.5mg，分装在EP管里，保存在-20度。/ t9 U- u: |6 L* N
3.取2份即1mg加入100毫升培养基里，终浓度为10mg/ml。（盐酸为0.5ml.本人已证明对100毫升pH 为7.4的培养基的pH不会有明显影响）
. f, m4 V& V- j8 v# c Z# }7 ?# c' E7 Z
非水溶性地塞米松干粉（分子量为392.5）：保存在2-8度，在无水乙醇中不需加热溶解度是25 mg/mL 。8 B5 w/ c/ n5 f0 j
1.电子天平称取3.925mg溶于5ml 无水乙醇，浓度为0.785mg /ml=2mMol/L。过滤。
& n) d& B9 ^4 n7 P# W% o1 n2.分为100份，每份50微升含0.03925mg，分装20份（余下的使用前再分），保存在-20度。- o" X: H7 i' R8 U% j4 g; B2 v
3.取1份即0.03925mg加入100毫升培养基，即终浓度为1M。（无水乙醇为50微升）如果是水溶性的则方便。
7 {6 M B7 q: j
. @9 u2 o$ J. QIBMX干粉：保存在-20度，在室温下也是稳定的。It is soluble in 100%DMSO at 1 M with gentle warming." R% Q+ S9 F, ^; B* y
1.99.9mg（实际包装是100毫克，故是100毫克）溶于2.7ml DMSO中，浓度为55.5mg/ml，过滤。& O+ z. S- V& r
2.分为18份，每份为150微升含5.55mg。保存在-20度。# b6 T. K7 p- b) g% S9 Q! H
3.取2份即11.1mg加入100毫升培养基 ，终浓度为0.5毫摩尔/L。（DMSO为300微升。可惜稍微多了点。）
+ Q5 r) H. h0 z# L/ q$ a3 ~5 p8 q, ~% _+ f+ J4 {
以上三种同时加入到100毫升的培养基内，配好的诱导培养基如果短期内用不完，同理分装冷冻。
+ W( k- _. o" _, b# M本人全部过滤，考虑到在称取试剂时很难无菌操作，进口分装试剂本身和溶剂本身的无菌状态难以肯定。但过滤时滤器会损耗溶液。& G& k+ X) U6 }9 f. Y2 Q
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( c* v9 z( N) X1 u) }. ?' o请使用前阅读Sigma的说明书。个人操作共同分享，恐有不当，仅供参考。 |
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发表于 2009-8-4 11:59
