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- 积分
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本帖最后由 泡沫清风 于 2009-8-17 15:43 编辑
+ Q4 V8 D1 ^% h% I
. S" x6 c2 ~; H; |不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！6 {: k; s# l* D2 U
) L+ h4 x8 n5 Z& U3 H; l我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！
3 j/ B4 }, ?% j, u( i; q3 h3 H- S# S0 z, F D- w
接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！
7 B* l+ R6 T1 V" ?) j! Q/ B2 F& K+ o9 N8 p$ z9 Z
* ~$ `. k/ t: C: Z1 w D3 n第一天还是复苏：
# j n: e2 b6 }2 e ?' I& Y实验准备：- Y$ B+ f% L* p. e/ B
（1）DMEM：Gibco（高糖）
5 q1 |' G3 }& J! e- e& R, T（2）FBS：HyClone
* P7 r. u* d I' n 培养用DMEM+10%FBS
2 w9 X+ V- q+ h. [2 W9 X L+ J0 l
5 }1 R! S7 ?6 y4 L! w$ b8 g3 G7 y实验步骤：
. ~" R1 [8 C+ b- v- W6 y6 z7 ^, |（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）7 Z% X- K4 ]6 O' Z! n$ ?7 R
（2）37度水浴复苏一支293T细胞
8 w- a% r$ P6 V# I5 a（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次% S( r1 z6 b0 J2 T; r
（4）1000rpm 常温离心5min o/ t3 l) F( _6 e; `! A' \/ {
（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。3 P; y' [- v. l/ D
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）
/ ^- \4 I3 ~& D4 [! Q（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。
0 h7 s z* U v4 ?$ a6 V2 d9 R（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧） |
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发表于 2009-8-17 15:21
发表于 2009-9-1 23:16
