“小二”归来——细胞复苏

泡沫清风

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不好意思，各位！由于我外出了几天，所以耽搁了！Sry！
% }5 S6 M* b- c/ c1 o) T
4 B, ?: b5 ]: m  C我是上周6早上复苏的细胞，但由于周末出去，所以没有空上网来发帖，因此把这三天的一起发上来啦！+ p* H/ K6 z" Y3 E9 Q
. Z& l, t$ @$ \" L1 l) c
接下去几天的实验中，如果大家有什么疑问或者建议，请提出来哦！. H7 w" ]1 W8 r
" d! T+ y: u4 I! R

& p5 L1 X0 U# k' Y6 A9 j1 {  M第一天还是复苏：0 u, K- n( |6 P! H; n" I
实验准备：/ j0 ?* w- R+ _! a: p/ G5 `7 s8 `
（1）DMEM：Gibco（高糖）  . j7 }( M  l0 A0 l9 v3 j
（2）FBS：HyClone
. Y6 Q- Z( G. u- E5 _3 R* D  培养用DMEM+10%FBS
0 m, [! h+ g/ G  k9 P
2 o' j7 L7 D: |/ _2 W1 F) E2 L' @实验步骤：
; n4 C1 }& u. ~8 d  T9 V（1）在15ml离心管中加入5ml常温的培养基（293T细胞怕冷，培养基最好在水浴或常温中放置一段时间）, @, R% Z2 I* k6 ?3 K8 B
（2）37度水浴复苏一支293T细胞, \6 K( V9 h, L
（3）将解冻的细胞液（1ml）转移至5ml培养基中，轻轻吹打数次. ~! y& ~0 Y) h/ U% y: \. \! q
（4）1000rpm 常温离心5min, F$ ?- D+ @' L3 E% g  M7 t  s* M
（5）在一个T75培养瓶中加入10ml培养基，浸润内壁。+ O" f8 d% l) h  o
（由于这支细胞冻的时候是根据T75的量冻的，所以直接复苏到T75瓶中）( `! s; Z7 F1 H3 _% n! V$ V
（6）离心完，弃上清，加入新鲜的培养基5ml重悬，轻轻吹打数次。接种至T75培养瓶中，轻轻摇匀。
  _# _& D3 ^8 j7 m! l1 J5 ~（6）放入37度，5%CO2温箱中培养。（培养瓶盖勿拧紧）

hualin840518

顶

sajia

学习

鹤之舞

1# 泡沫清风
# ]2 q+ w0 a* D; F* B) @4 p- D  @  c+ M/ j. j, F
, D0 H( {3 T1 z3 H7 c
非常感谢

joicie

支持~~~~~

mmssyyee

冻存的时候一管里有多少细胞啊？加入5ml的培养液会不会有点多啊？

泡沫清风

回复 6# mmssyyee " Y3 i) o) B9 ?: Y& T) S
细胞数3*10^6左右，具体不清楚了。我都是凭感觉冻，不怎么计数。
. G# b% _3 s7 d: F一般复苏细胞的时候用3倍以上的培养基复苏

mmssyyee

回复 7# 泡沫清风 : e7 t$ f; O/ ~
3 i; S  ^1 q' d
; u" p1 j' q( |
    谢谢！

camel_stone

一般我组复苏细胞，会在一分钟内使其完全溶化，所谓慢冻速溶。

dlhhhhh

我来顶顶、、