第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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$ ^8 h1 h$ e$ i/ F# _第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞, D2 L& S0 H% o- T7 Y+ m& h
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2 O2 k1 ?; N( E3 x0 r, z; j3 k不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：
$ R: L# S, l& b* Q, m- D, j9 |* ]5 r5 M
实验前准备：* \* B; r# R& ~4 X/ [" }" [
（1）DMEM+10%FBS
" I% Z: q) {" l' {$ M* e: p! z（2）PBS
! c* q  w4 K* i3 K5 C（3）0.25%胰酶: b5 T, ?% H  _, `$ i
（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
/ g. ]" x! n* T
2 P- l/ b8 ]$ V7 T4 i, }+ E1 k, `实验步骤：
! C) ~! e4 `7 s; S1 B/ `（1）弃去T75瓶中的原液。& `0 x8 R/ r! k1 n0 r# Y- Z* m1 m- l
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
& c/ v0 k# j3 v, {" T（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。# _- L5 R+ e9 r/ P) B
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。5 y( B3 ]1 a% Q1 h  _0 u6 \
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。9 r6 q' f( H8 d, k5 F
（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。
  I8 T0 a0 p0 ]（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。3 I  H* i: U2 z% D' e  s3 R7 \
（8）放入温箱培养。
, `1 K# S! ]  X" x0 S( g+ G, @(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？
/ _/ h5 S: Z8 u: \& |2 J/ D6 @; o一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：
! z9 M( k. }1 ^这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1
$ R# L1 Q, H' C  e6 d把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！