第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

$ C$ x% b; g  E! x* M7 U4 O4 i1 J  C7 ]% y) D
第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞0 g$ w/ ~: o3 E6 @- |& V: @

6 Z( S9 O" p: W; y$ k& f# w

游客，如果你要查看本帖隐藏内容请回复

6 R: N6 y  B. W" a不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：
0 m6 o' o. I7 F" H6 ~+ \: g9 F  B3 L% ^
实验前准备：
! d" N6 ~/ {% W6 a0 B- B  m（1）DMEM+10%FBS
5 M( }3 N$ u$ \( S（2）PBS/ @/ M* K# m* j  L8 M* n: c% a
（3）0.25%胰酶
  V) w$ m! y0 }6 P4 \% E（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
4 ]- g2 ]2 w! Z" X- R' C/ ^2 }! a  C  y1 q) a
实验步骤：* t, d3 d+ G3 e9 b+ [1 m- P
（1）弃去T75瓶中的原液。: `3 P5 A: K# z  y  ?
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
; I# e3 L/ T8 m( y/ S（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。# I( X  E8 O' D9 e5 x5 X# V
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。0 X' G- q# w2 t
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。+ m) s0 ]- {, o; ?
（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。
6 W& N1 {# J; q1 B3 p' Q$ g- A$ y（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。5 ]; c$ U- W' M3 R2 O
（8）放入温箱培养。
' f+ F/ _$ x2 V(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？- [: M4 {2 _* Y9 N! @0 c
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：8 h9 l% C9 s% y  f2 [+ r  s/ b
这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1 + n8 O5 U$ g' `' S2 I" o2 V
把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！