第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞
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不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：
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实验前准备：
* S8 O* z9 f* T  y（1）DMEM+10%FBS0 b5 `4 y7 o" a' M; P
（2）PBS
2 |3 Y0 H* }" L2 x( _9 g（3）0.25%胰酶( r$ W; U2 S1 {+ `7 [5 G% l2 D$ t  G
（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
4 K- p7 v* ]- M, b+ {% w/ g, J  D6 v! O/ [+ Z
实验步骤：9 A& H8 H+ @3 ~- H. s8 l5 V
（1）弃去T75瓶中的原液。
' f! z) f, k7 p! u（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。' S, J* C+ U5 q8 {) P- t
（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。) j9 f- x" L, V5 O8 A6 e3 n1 d
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。# M) _. c  @2 x3 I* c
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
) m1 b2 ]5 V2 G. h( @/ ^（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。
! e5 c, _) y$ m) Q* X7 W) s9 d# [4 f（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。: B; ~) N; ?% ~! |# x# p7 Q& M
（8）放入温箱培养。
8 t) B1 [4 g" @  E9 q(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？
* U  I- Q" m/ S  K. ?3 ^9 ^$ l一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：, `& `$ i2 B$ f! n& M* Z
这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1 4 f4 c3 ^1 I8 }/ n- W
把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！