第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞
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7 N& E$ d0 q$ f2 B2 P不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：' x+ ^1 Y7 s% V1 J/ B" A" ?) Q

  v/ e/ D+ L) Q0 i, s7 p! }) y实验前准备：* G7 u/ M7 V4 ?" N+ Q, u
（1）DMEM+10%FBS
' k, n3 B/ C) z' S3 B（2）PBS% }7 z" d+ I2 R/ ~+ z7 K5 W
（3）0.25%胰酶
8 c2 x$ {8 O" E: v（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）
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实验步骤：( q' ?1 }" @* A% d6 y
（1）弃去T75瓶中的原液。  g/ j* m6 i, H4 Y7 U/ X$ W  s' i- J7 o+ v
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
4 q7 B: ]6 W/ E（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。& v9 B# ]/ D: X
（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。! X4 W& k- B. I; n: m0 Y6 h
（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。: a8 b* Z# `7 Q
（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。5 r) r2 v. V& M4 p; ]# }% k
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。4 L1 K8 {" j" p0 T1 r
（8）放入温箱培养。
% C( ?2 O7 O; Q1 B. c. d) X(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？
) y, G. C8 a0 j, x% n! n$ x一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：  C7 I7 S* c' A* t. J
这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1
4 W+ V9 z+ \" R7 P把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！