第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

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第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞
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: s' v) K+ X8 y4 U: ]不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：
8 z) [7 S9 e0 z. o% e6 o& y( `  z" W* F0 ]2 ?4 W
实验前准备：
& `1 d. x, G% R" z（1）DMEM+10%FBS
* v4 J3 z! a* o3 q（2）PBS
$ P2 \3 U1 [2 o1 ]（3）0.25%胰酶0 N& f5 q( m# f8 C
（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）/ G  u- W5 r0 @* I) ~8 R
6 g+ r7 O9 q& }7 n
实验步骤：8 b. t& s% S2 o
（1）弃去T75瓶中的原液。
% U& `! T7 g5 \4 x（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。
7 I/ r5 P! v) K（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。
) l. t5 L4 [9 r  E（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。
- U2 B$ C# S. f4 h; t3 S（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
, K! ~, }( ?. o/ r, n$ g" d（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。$ i! E& t2 I/ |3 @# P/ m
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。8 \( r% @* G4 k& l
（8）放入温箱培养。- o, n" `/ c2 c$ {
(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？7 n% t* h3 T+ J
一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：
5 n' S/ W1 `! i5 J) Z这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1
7 V8 \# C! f( Z# m) [2 K1 Q/ C把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！