第三天（8月17日）中午观察细胞，并消化传代

泡沫清风

% U) `- E! d# T# Y) x
& ]4 G1 h7 ?5 D1 x' C( |第三天中午，差不多复苏后50小时左右，观察细胞8 P" D3 ?" j2 k% O2 T6 t( n

# I( k; T: E$ V5 }- j& F2 O! P

游客，如果你要查看本帖隐藏内容请回复

- `' J# F9 p: i+ C& @  p8 S* l不同的实验室消化传代的方法不同，我的方法可供参考：, V# ^: c  V! l- E1 Y
5 S- f) n" q" g/ @+ ~8 V, B
实验前准备：
: a) Y8 R. q9 ?' T+ I（1）DMEM+10%FBS  e  m, K/ o0 i
（2）PBS
1 s" Y, I# t# W  Z. U8 c（3）0.25%胰酶; ^8 p3 j# y+ `# J7 e
（注：同样这些试剂要平衡到常温再做实验）# T* k; Z% X1 t( z) A
# U: |4 a) C- J. a, R- S, v9 D
实验步骤：
4 E' z/ R7 D6 \9 J7 x（1）弃去T75瓶中的原液。1 ?% L. r3 w0 X" `+ G
（2）加入5mlPBS洗一遍，洗去残留的血清。! b  R7 l9 S, e/ J' R9 S9 Z: o
（3）加入3ml胰酶，大概常温放置1-2min。
, v7 H8 M7 V/ N3 Z" u* U# \（4）加入6ml新鲜培养基中和胰酶，并轻轻吹打内壁上的细胞。
# o* S. F  X5 v" I（5）将内壁上的细胞吹打下来后，充分吹打细胞液，使其成为单细胞悬液。不过也有老师和我说不成单细胞关系也不大，3.4个细胞成团没有关系。因人而异吧，呵呵。我一般吹打50-100下。自己看着办吧，也有人吹打5-10min。
) u. A: a& N8 R5 |" Q% b4 `（6）吹打成单细胞悬液后，转移到50ml离心管中。1000rpm 常温离心5min。2 c0 F, O# L0 a3 U
（7）离心期间另外准备两个T75瓶，加上原瓶，共三个T75培养瓶，分别向瓶中加入10ml新鲜培养基。离心后，用15ml新鲜培养基重悬。充分吹打后，平均转移至三个T75瓶中。混匀。
8 Z. \& U3 y+ J$ R/ @% a, G（8）放入温箱培养。4 A; R" V$ B3 L* p5 ~
(注：我一般一个T25瓶长到80%左右传到一个T75瓶。而一个T75瓶长到80%左右传三个T75瓶，也就是1：3传。)

have-a-rest

有个问题，293培养基中需要添加丙酮酸（钠）吗？抗生素呢？
! t. P- K; P& Q+ i一点建议：胰酶里面添加一点EDTA，也许就不需要吹打那么长时间了。

hualin840518

good

hualin840518

图片是用成像系统还是相机照的？

mvirus008

持续关注

mvirus008

有个问题请教一下：
4 \2 K8 e" H8 M8 ~这个细胞传代能否简化一下,(胰酶消化后直接加培养基把细胞吹散分装，省略掉离心再加新培养基再分装)，不知道这样行不行？

难得胡涂-1

能不能消化后先倒掉胰酶，加培养基再吹细胞？这样也不用离心啊！

泡沫清风

7# 难得胡涂-1 ) Y) w8 C+ W* f  u5 V
把问题发在疑问贴里吧，这样我不用找。我的回答请到疑问贴去看吧

chenghoby

好的

轩辕之客

支持下！！！！