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泡沫清风

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- N/ w- \3 m4 _; L" a) ^建议和问题都堆到这边来 ！这样便于查找和回答) q+ K! E9 O! ?& Z  H" {: r9 W4 x

6 n# I  H+ N0 s- e我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化# U! `, N) T8 i, _* w5 g5 e! X
因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

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# y1 w2 x) e# S: F" h/ t- \" O( G' a) L% B$ }6 a/ _. W( ~
have-a-rest 的问题：
8 v9 K# k6 d% R+ x. g5 V1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠# ?9 c9 Z' ?; f$ J% [
2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗* P% O$ o" b$ [$ O$ S4 _# i
3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

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$ n2 N" [! E2 B& L' a& u  j) J
& P6 c3 I1 _6 b3 q* Yhualin840518 的问题：
; w8 T1 I- I; e& ?6 Q- Y. dnikon的荧光显微镜自带的成像系统

泡沫清风

+ Q' O2 l: k0 F4 L- a- G: K) ~3 R0 W+ d6 p' o2 ]
mvirus008 的问题：
8 ]0 `, W( Y: _* N) W可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！
2 ^0 h- V" K( ~$ s1 @7 q) E+ s而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏4 U- I& H7 J9 p' g# b" }/ m9 x
美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题 - C* x; A( y/ I/ \/ H& c7 P
293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

泡沫清风

6# gemstone
2 ~$ w% e3 {2 K- u# o+ d
, \  a/ X! }+ o4 v- w/ ~呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！( s" e" ?) H+ r: q6 F0 L
转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

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8# wangming
4 b! J6 }8 N* q4 o1 E我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？