建议及问题贴！都把疑问发这里吧，别发其他帖子里，难找

泡沫清风

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建议和问题都堆到这边来 ！这样便于查找和回答* D% L9 [4 }- i2 V  `4 O) k

& k( L# X! k* T我先说一点：培养过程中，我没提到换液，说明就没有换液！一般细胞种上后我就放在那里不怎么去管他，等他长满了消化
8 @+ f2 [: R' x# t; C% D9 j因为有人问我这个问题，所以我先回答下，呵呵！

泡沫清风

6 H. O6 @: o; N4 z* f, [; S$ b" t% t

& D. d8 l7 S7 D: l/ W! ihave-a-rest 的问题：
2 @! M, V' ^! [# P0 Z, q1、我们的培养基买的是GIBCO的粉末，含丙酮酸钠& L$ h4 x* k' O1 M$ b
2、双抗加不加依个人习惯，我培养不会污染，所以就不加了！而且包装病毒和感染的时候最好不要加双抗
7 m. e& C& l+ T( K1 n; J9 X* {1 U. G! s3、我们以前也用过胰酶+EDTA，感觉太强烈，不利于细胞下次贴壁，293T细胞本来就是贴壁不牢的细胞系，0.25%的胰酶消化已经够快了，有些protocol还建议用0.05%的胰酶。还有专家建议胰酶都不用，直接吹就行，我们也试过，吹完了细胞碎片很多，背景很脏。吹打时间长是因为293T比较粘连，容易抱团，充分吹打成单细胞！

泡沫清风

4 H% ?0 _6 j" u: M2 D

4 A* L+ C6 t) D# mhualin840518 的问题：
. W8 F# m  z& Tnikon的荧光显微镜自带的成像系统

泡沫清风

0 v1 h3 e4 F, f: ]" ^3 G
+ C' D% c( }& l; ^, d/ O5 ?2 I
mvirus008 的问题：
! u; U0 b" E! V" b* ^) H* ~可以不离心，确实也有人这么做，虽然是中和了，但是仍有残留，我觉得不好！
, Q# z$ o5 x% W$ L而且不离心细胞碎片可能会多，背景比较脏1 I. i0 \0 _2 C4 J) z7 E0 r  E
美国那边的老师都推荐离心。

泡沫清风

难得胡涂-1的问题
0 O$ t0 S( z1 P9 W3 p293T贴壁本身就不牢固，你很难把握，稍微消化一会细胞就起来了！倒胰酶，容易倒掉细胞

gemstone

建议将0.25%的胰酶用PBS稀释1：4，然后对细胞的损伤会小很多，这个细胞很容易消化。转染也要特别小心，不小心就会漂的。

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6# gemstone
. j  s7 Y: t% M) |0 ?8 ~$ S$ E! d/ w6 T& d8 Q
呵呵，我上面说了，也可以用0.05%的胰酶！, ~5 r9 |, Q; x1 b
转染我后面会说的，我铺了poly-L-lysine,所以不太会飘。而且就算不铺poly-L-lysine，我们的细胞还是比较牢固的，细胞比较好

wangming

比较过铺明胶和poly-L-lysine的效果吗？我用的是明胶，经常出现很多白色颗粒。

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8# wangming 9 H; l  Q9 r5 U% ^( Z3 V
我没有用过GELATIN，GELATIN一般都是在培养ES时用于铺Feeder的吧。

sajia

我想问一个巨弱的问题：第一天和第二天的图片上黄色的圆圈是啥啊？还有怎么判断宝宝长的好呢？光看触角么？