第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

' x* [& s: d2 b3 \- ?

+ ^& y2 ~9 t' k0 Z铺皿后19小时左右，观察细胞密度：7 I7 S7 f$ }. c# a2 U& v& |: l, e

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$ j% @- k5 {$ T) w+ z
; a5 X' s& J* E6 a7 A实验准备：- e4 Z$ ~* l! s8 R. s- [/ J9 S
1、培养基：DMEM+10%FBS
, X% `9 \# u+ W# `: d" `) p2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
# b/ k! ~& y: s  X3、OPTI-MEM （GIBCO）
6 J4 M3 z% a3 k0 G5 r: w4、质粒
8 C' V* c$ s9 D9 J   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP& _4 U% d' M$ V6 C) Y5 @' f
                        MSCV-IRES-GFP
" e+ p$ @* N4 T' K# S    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG% Q9 r+ [" x) l" I
9 ?0 t/ a0 d' S9 [' c
实验步骤：
- F  b* J7 v. ~" y# V5 T& U1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。: d, N) U; m+ q. I4 U7 F5 J
2、制备质粒-lipo 2000混合液：
+ S' k2 W% I! k; W# V: b（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
0 }7 M: c9 i: u0 ~
( ~* n" Y, J4 p- e4 J& Y  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
( i1 \( r; Q" _- ]   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）! R/ L! S8 H5 _( D$ z- s/ r
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）( \0 U1 W1 ]0 y+ k5 r) t/ V0 @: b( i
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min% G$ f3 G/ K. [; u* u, T1 i
3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。1 |) L) O" o4 Y3 o. j
4、放入温箱培养，到6小时时换液。

董董董

啊啊啊

小花花1128

谢谢

郑卓越

学习学习

拉二胡的拉尔夫

看一看

veda327

这个好贴啊！

UlissesJR

学习一下

wenly

不错，真心觉得学习了很多！

Liyun65

学习中

Llxue

学习