第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

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. S0 j+ i2 y9 G3 S$ \( \2 \7 @
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：8 T$ c+ d- G- ~3 W6 F2 }+ Q- F

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1 U) B+ D. z7 H; v7 T% m" P# a

! }1 y0 F( R: I+ }. ~实验准备：3 _8 a" m2 q6 H) N; Y* I
1、培养基：DMEM+10%FBS. Q! i3 C  G6 s7 y
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
# v% ^' `3 a7 x6 ?- B3、OPTI-MEM （GIBCO）
% @, t1 s- v# j6 k4、质粒' k9 c7 p' x! y2 E
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP8 Y) \( L& G  c4 B
                        MSCV-IRES-GFP8 L* K5 |! ]* J; c' Y% O2 ]
    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG
8 w# s& Q+ B8 _4 N  q, J  q/ q8 G; [( ?
实验步骤：, B' @! {& t2 K: Y
1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。
; y5 ~" u! `; T2、制备质粒-lipo 2000混合液：  R$ h$ x; J; n8 k
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
6 F4 E" ~  _4 U2 C( @
& ?# H+ K$ S- l/ g# o% r7 B' j' g  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
" N( E+ ^% N+ F$ Z6 V) {   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）' {2 {. F; G3 ~( G9 e
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）! v, K: d1 @  K( E, {6 V* o
  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min+ f: I8 |$ L0 l! {2 A6 i  c
3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
% T" R' v6 z$ N8 Q* I; F; }0 j4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

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cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了