第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

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: x! U. Q- n% B/ G1 g) p4 V铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
- ~4 `$ x; t2 L

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6 |! z: u2 L4 B( q( p/ K8 n4 i: n0 d+ ]
实验准备：# Y/ [. I6 w6 M. d. X- y3 V( ~
1、培养基：DMEM+10%FBS
1 d* B. S3 g$ E, H) u7 o" H2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
% [, D3 W, v( `: f3 V- o3 T2 i3、OPTI-MEM （GIBCO）& A2 O9 X: n& k0 z) H; S
4、质粒; `# ]( @7 d$ E9 ?  Y
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP
4 h. R. G- y  _7 W0 a4 Q! W! R                        MSCV-IRES-GFP
! b( ~% D  R+ G1 @$ w* f    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG
% R1 w. q; Q4 d2 s" U! e' u: ~  }$ Y5 D* @) c3 T
实验步骤：
1 u. B1 N% _6 n! X6 D$ I1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。
" d9 {. _$ o, f( I) U2、制备质粒-lipo 2000混合液：/ N, ^9 h' V( E0 H
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
! v( K1 `4 q3 V  Q8 I6 V" n8 a
5 P, e( P" J5 {2 _  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
  z9 W. m& O' P' S; S9 J" p   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）
6 n" ]2 m0 g9 g3 r, f. [  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）
4 a$ I, i: P: e/ u  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min
9 h7 Y6 Z: v5 T3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
! L, G  f% K, M2 D' }4 z7 i4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

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cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了