第六天（8月20日）上午，接种质粒包装病毒

泡沫清风

& `/ U, h# M/ j( L  \4 M6 }" F1 a% a& R: }# P4 P4 g' Z0 f+ i5 ~
铺皿后19小时左右，观察细胞密度：
+ X4 J! y: n+ s) h, r4 ?) U

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" Z$ A2 i6 H+ d: [5 s- v
- V4 |% U0 C2 `; j1 N# \
实验准备：
$ `/ H# c1 n4 p! Y) w) S8 ?1、培养基：DMEM+10%FBS4 U( S2 }5 h- I3 e1 g. }" ]1 L
2、lipofectamine 2000 （invitrogen）
7 O8 I/ ?0 F  k5 P! b3、OPTI-MEM （GIBCO）
% X* `3 _6 F" L0 ~2 W8 I: e4、质粒% U; f3 K! B6 S" U: a& n
   两个目的质粒：MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP  B- t4 Q4 H% h
                        MSCV-IRES-GFP
9 }/ V* W7 z* Q0 `( {9 J    两个包装载体：pKat和pCMV-VSVG
. M$ p" W2 [& h, j
- G0 f+ r  t( F实验步骤：
1 ?/ P% M! L5 G( P/ v' \. z1、弃去6个皿中旧培养基，各加入4ml新鲜培养基。
" m# W% I( \& G1 Q2 W0 a2、制备质粒-lipo 2000混合液：$ T- X6 P! R) ?: F- @
（一个10cm皿我用质粒的量是10ug，lipo2000的量是20ul，OPTI-MEM 1ml，6个皿中其中4个皿用来转染MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP，另外两个皿用来转染MSCV-IRES-GFP作为对照）
7 [2 s: `+ u" ~& ^+ N/ `; ?1 t. l5 c' _9 Y
  （a）取一个4mlEP，加入120ul lipo2000，再加入3ml OPTI-MEM，混匀，室温静止5min。（6个皿的量）
0 k) H- {8 a. X' ~   （b）取第二个4ml EP，加入MSCV-IRES-GFP 10ug，Kat和VSVG各5ug，加入1ml OPTI-MEM。（2个皿的量）4 C$ I. T5 i( J5 f" c8 f
  （c）取第三个4ml EP，加入MSCV-BCR/ABL-IRES-GFP 20ug，Kat和VSVG各10ug，再加入2ml OPTI-MEM。 （4个皿的量）
6 \% y$ H6 n* g2 g+ \0 F  （d）取（a）中1ml于（b），其余2ml到（c），混匀，室温静止20min
5 u3 Z3 ]/ ~8 f6 w! N( w3 s/ `3、在1-4皿中加入（a）与（c）的混合液各1ml，5-6皿加入（a）与（b）的混合液各1ml，注意一滴一滴加入。这样每个皿都为5ml总体积。
) T9 w) H  m' u3 H5 Z  k  \% ?4、放入温箱培养，到6小时时换液。

轩辕之客

沙发！！！

细胞海洋

图片很清晰，内容很详细，谢谢

mvirus008

see see

john8707

期待啊~

biowx

hualin840518

hualin840518

cortex

xiexie

chenghoby

老师辛苦了