全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

6# li-baby 3 W5 A  q6 g0 Z: T. I. p
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2 o+ L! ^2 P' i- K! G, Z0 x$ r能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢

zlz2626

5# 饶冠华 ! {# g. b2 L* e* h9 a% u4 k

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谢谢了  我试试

li-baby

密度梯度法细胞不贴壁，离心转速有点高吧，我们是1800转还算可以。

饶冠华

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4# zlz2626 4 {+ V% u- K7 Z* u5 F, O0 R' \
不可能吧，所有显微镜都有明场啊  你把滤光片调到没有颜色的那个档位  你去问问你们师兄师姐吧/ d# Q9 \! S% Y. n
另外，你把细胞传1~2代  杂细胞就应该会消失的.  另外建议你搜索几张MSC的图片看看，就心里有底了$ @2 l" L" \- x& L. C$ E  S. `

zlz2626

3# 饶冠华 5 h) y0 Y* T& u: G5 H& c  @
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还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   / }- i# s9 x1 g
至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

饶冠华

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图片看上去怎么这么怪啊？ 为什么要用绿色背景啊？ 好难看~~  你为什么说觉得MSC很少呢？仅仅凭目测吗？还是你有染过MSC的marker??   你觉得那里面都有什么其他杂细胞呢？ 有没有依据？
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这张图片看不太清楚，建议你用倒置相差显微镜照明场 再发上来看看

zlz2626

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！( L6 k' t) }: E; x" C
这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      & m8 t$ X, A) T, l  s
密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  6 D1 ^3 h) _* l2 `# |% S
1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以) U0 M/ J% j/ ~! I: w  t$ m
2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？7 c% w  T$ J- p
3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  
9 w% ?# Q! H  c) L8 E" l% N) }   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？