全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

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第五天的  全骨髓提取法

zlz2626

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！
9 a( z' @6 U9 ]1 n2 s0 R: i, G 这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      1 r1 q' U; z2 i8 I
密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  * }& H* C- b, B  O: L
1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以
+ B- N6 g0 U" y2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？
7 k4 R7 N  [! Q3 Q; t0 I3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  5 p9 @! ^; B+ N3 Q
   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？

饶冠华

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图片看上去怎么这么怪啊？ 为什么要用绿色背景啊？ 好难看~~  你为什么说觉得MSC很少呢？仅仅凭目测吗？还是你有染过MSC的marker??   你觉得那里面都有什么其他杂细胞呢？ 有没有依据？& s/ `9 I7 `6 ?$ b: C# ~$ r# P& @

4 Z4 b, f3 G/ Z2 G& l这张图片看不太清楚，建议你用倒置相差显微镜照明场 再发上来看看

zlz2626

3# 饶冠华
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3 u. f" t) L  P  H, p
还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   " v* Z! ~# f* Q* e+ l" @1 e
至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

饶冠华

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4# zlz2626 ; Y7 s: }$ V5 z, j
不可能吧，所有显微镜都有明场啊  你把滤光片调到没有颜色的那个档位  你去问问你们师兄师姐吧
% ?$ {8 N2 I2 j. o+ L/ U& E另外，你把细胞传1~2代  杂细胞就应该会消失的.  另外建议你搜索几张MSC的图片看看，就心里有底了* F! \* l( @; }

li-baby

密度梯度法细胞不贴壁，离心转速有点高吧，我们是1800转还算可以。

zlz2626

5# 饶冠华
9 I- c5 V$ u8 O$ l2 P4 Z
& k; E2 c5 x. u0 X5 ?
: u1 N& }0 v/ r: v* Z% w谢谢了  我试试

zlz2626

6# li-baby
. X# H- i! `& c6 V8 K. k# [2 i( R9 X4 q( T4 j9 r: F
; U- J1 l0 \; r8 U: H6 [
能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢

02402122

我不建议使用PERCOLL( i' I( T+ D8 Y. b# w# I5 X3 \
全骨髓贴壁就满好的
$ ?  `. V+ o3 C当然这是我的意见
- B. j; z- y6 |/ v传三至四代细胞就能纯化很多- N' G; W! u' O2 Z( U
不行做个鉴定吧

凤仪飘雪

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉 ...
. ?" Q9 \! b9 g( }zlz2626 发表于 2009-8-24 19:07

" d1 O0 l6 E8 p# D, b# g. x% X6 U! _/ h' ?

4 y. z/ W" x9 C, F5 d' Y0 g3 ^    percoll应该用1073的才对吧？还有转速的确太高了，我平常都用1200~1500就足以分层了，20min就可以。不过经过比较我还是觉得全骨髓法效果比较好，用分离液细胞生长非常慢而且状态也不好。