全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

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第五天的  全骨髓提取法

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上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！2 P' g2 A9 F6 ^: Z7 A2 r8 [$ L# |2 @
这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      , j5 j0 L4 D" |3 M8 L" `
密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  ! h# ?0 F+ ]$ }! [
1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以( E$ b; Q" i/ J  v9 Y1 T
2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？
% q+ c2 r- ~- I& N1 V7 m# S3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  & @. g- V1 |" v7 Z
   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？

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3# 饶冠华
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还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   
% c0 A& u, Z1 _2 U. }8 i至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

zlz2626

5# 饶冠华
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谢谢了  我试试

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6# li-baby 5 Q/ n; A. M' G7 b6 k* K4 g  v  X
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0 U& r$ _8 y/ `0 B2 W能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢