全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

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第五天的  全骨髓提取法

zhang_tao1985

从你的图片看可以看到bmscs，而且量也不算少啊，况且你没有鉴定，不能确定细胞类型的，还有就是你第一次换液的时间是三天，是不是有点长了啊，我看到过国内的一篇文献，做过对比，4-24小时贴壁的细胞是最适合培养的，72小时其他杂质细胞也可以贴壁了啊，试试看提前换液，可能对于杂质细胞的清除比较有帮助，还有就是传代以后的细胞纯度会比较高的。, W* H7 J5 }8 Y3 l3 c
看看这篇文献，希望有帮助( J+ ~; k$ s6 w5 T9 j

wsrz

很感谢很多高手的指教哦 不过有几个疑问还是没明白  鼠源和鼠龄，接种的密度 胰酶的浓度 消化的时间 相信大 ...1 s6 u0 ~5 u# l; H
why121 发表于 2010-8-19 12:11

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    我用过110g（约4周）、60g（约3周）的SD大鼠，觉得后者培养出来的状态要好一些。接种密度一般在1X10^7/cm2。我感觉干细胞消化时间很难掌握，不好消化，我一般是胰酶+EDTA消化3min，再吹打、离心、传代。

小熊不杀生

Percoll 1800r 离心20min可以，你的离心转数有点高，所以可能导致细胞不爱贴壁，而且Percoll是比全骨髓法生长缓慢的，但是目的细胞可能比全骨髓法多，建议你别着急，继续培养着，最好还是能做个鉴定看一下，如果你后期需要的数量多，更应该做个鉴定

yedanna

我也是全骨髓贴壁培养，一般情况下第5天就会出现很多个CFU-F，不象楼主的细胞那么分散。percoll本身有毒性，不建议使用这个，全骨髓法到第3代左右就已经很纯了。

why121

很感谢很多高手的指教哦 不过有几个疑问还是没明白  鼠源和鼠龄，接种的密度 胰酶的浓度 消化的时间 相信大家都有不同的感受吧 能分享下嘛 好让我们能找下基本的原因 谢谢

why121

很感谢很多高手的指教哦 不过有几个疑问还是没明白  鼠源和鼠龄，接种的密度 胰酶的浓度 消化的时间 相信大家都有不同的感受吧 能分享下嘛 好让我们能找下基本的原因 谢谢

色色兔

来学习下。

凤仪飘雪

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉 ...
1 g; F$ E  g8 a3 nzlz2626 发表于 2009-8-24 19:07

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    percoll应该用1073的才对吧？还有转速的确太高了，我平常都用1200~1500就足以分层了，20min就可以。不过经过比较我还是觉得全骨髓法效果比较好，用分离液细胞生长非常慢而且状态也不好。

02402122

我不建议使用PERCOLL
7 Q8 w( m0 x5 t2 X. O6 W全骨髓贴壁就满好的( J" `, [4 M0 Z& Q0 w% g0 e
当然这是我的意见! Q% H/ e' |& S/ X* P3 ]4 Q
传三至四代细胞就能纯化很多3 l2 x+ n7 _2 G% a0 K' r: J3 O
不行做个鉴定吧