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楼主: tiangao
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骨髓间充质干细胞原代培养换液问题讨论   [复制链接]

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包包
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发表于 2010-5-20 07:47 |只看该作者
5天半换液,说24小史换液的都是在扯淡
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发表于 2010-5-17 12:03 |只看该作者
我们做全骨髓法,首次是72小时换全液,以后隔日换一次液,细胞数量少,而且看不到多少细胞变形呀,还是圆的呢!是不是换的次数太频繁了,还是其他问题,急呀!1 e' N5 z3 v7 ^6 o
另外,还有在换液时用PBS或培养液洗吗?
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发表于 2010-5-14 23:23 |只看该作者
我是全骨髓贴壁法,72h换半液,以后3-5天根据培养液的颜色换全液,细胞生长极好
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发表于 2010-5-14 14:37 |只看该作者
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我们是72h换全液
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发表于 2010-5-14 10:46 |只看该作者
细胞计数用细胞计数板呀!方法如下:
7 {( s8 C& {7 ?- ^细胞计数板,通常是一块特制的载玻片,其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半,每一边的平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间的大方格即为计数室,微生物的计数就在计数室中进行。
7 v  j9 c5 N  l& j+ G  X+ [1 s+ y8 E& L, v6 ~
计数室的刻度一般有两种规格,一种是一个大方格分成16个中方格,而每个中方格又分成25个小方格,共400小格;另一种是一个大方格分成25个中方格,而每个中方格又分成16个小方格,总共也是400小格。所以无论是哪种规格的计数板,每一个大方格中的小方格数都是相同的。
" X  S8 b5 ?; R: F: U" x% R6 u% {7 \7 ]' R
每一个大方格边长为1㎜,则每一大方格的面积为1㎜2,盖上盖玻片后,载玻片与盖玻片之间的高度为0.1㎜,所以计数室的容积为0.1㎜3。其计算方法如下:
% h: R' Q9 P* A$ j% H
. B1 @2 g6 m) V5 P" W( u" H1.16×25的计数板计算公式 " q$ G) i/ K6 {* \

# `! z6 b: y. G) N& s6 V/ m0 ?细胞数 ml=(100小格内的细胞数 100)×400×1000×稀释倍数
2 [# Q: M# }8 C( z; P6 e- P! f/ n/ _, f" J, c
2.25×16的计数板计算公式 8 b( I& ~; e. ?7 \

& O* E- p9 g2 L3 X. w8 m细胞数 ml=(80小格内的细胞数 80)×400×1000×稀释倍数 1 |/ x: t- _1 \! _  b; S/ e  U; K1 r% J

) x* }' v: S$ @8 Z, `( B1 H; [# \实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中的细胞的数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。4 `0 b2 P& d$ V* p
具体操作:
7 j0 H. H  R! |6 h1. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。3 [7 j8 o/ }5 V$ j. p
2. 将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。
+ e7 T$ ^4 Z- g; m/ }8 M3. 计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算:9 a- G! Y1 V0 B. |
细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104
; R; C+ c0 L0 u; ]) r1 l( J说明:公式中除以4,因为计数了4个大格的细胞数。+ x+ U! S( ^) \) D  H0 V
公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为:% W( I2 n# p! L
1.0mm(长)×1.0mm(宽)×0.1mm(高)=0.1mm3 而 1ml=1000mm3
4 X2 M; @7 K* l(注意:镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液)
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细胞海洋 + 5 + 10 极好资料

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发表于 2010-5-6 21:39 |只看该作者
我也想知道  请各位大虾发表高见  谢谢

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发表于 2010-5-5 13:57 |只看该作者
我们是全骨髓贴壁法,72h换半液,96h换全液,效果也很不错哦5 k2 [8 V4 U# M! b* B0 }/ Q

$ r' A' s, \, T& t" G- `  ]& {杂细胞经过一次传代基本上就都被去除了
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发表于 2009-9-14 22:12 |只看该作者
我在48h换液
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细胞海洋 + 5 + 5 原创内容

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发表于 2009-9-3 09:12 |只看该作者
我做的是全骨髓法 3-4天首换液 传代的BMSC2-3天就长满了 中间不用换液 只要培养基颜色正常就不要换 频繁换液对细胞也是损伤

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发表于 2009-9-3 09:12 |只看该作者
再抛一个问题,传代的BMSC怎样换液?
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