小鼠囊胚细胞差异染色方法

大猪小猪落玉盘

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希望大家一起进步

抹茶跑跑

感谢版主的无私分享

抹茶跑跑

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" }% R, @: T$ f- U+ R3 }6 o# I有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉$ k$ r$ J" F2 H: w
“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补体和9 份0.1% PVA 的PBS相混合”
& k1 }8 ~: A# t& x4 _# }1 T这里提到的一份体积豚鼠补体，是指冻干粉溶解之后配成的液体吗，豚鼠补体冻干粉标明的是5ml装，冻干粉不是mg而是ml吗？是指要先用5ml液体把冻干粉配成5ml豚鼠补体溶液？
3 d4 P: k; _) @那么冻干粉是用什么溶解呢8 }/ u4 r7 f2 D5 v% Z# c
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冻干粉是怎么配的，一份体积指的是什么，有点糊涂

大猪小猪落玉盘

你说得很对，是要首先配成溶液。我记得我是用PBS稀释的，但我现在不能确定。我记得当时我是按照说明书配的。如果你购买了试剂，应该有说明书，上面一定会告诉你怎么配成溶液的。另附一张我自己做的图片。另外，再给你几篇相关的文章，有论文也有方法，你自己多参考，祝你实验顺利！$ B; |8 `3 e1 I) q$ W4 P& {

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抹茶跑跑

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0 S! p6 E- k9 p9 s" B7 W many thanks

抹茶跑跑

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之前查过豚鼠补体的说明书（sigma），但是没有找到具体的配置方法，请高手帮忙看下，谢谢

抹茶跑跑

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看了版主的文献，很有帮助% @& U4 f# i9 R: I5 S9 b# \1 n, `
还有些细节，没有找到答案, t1 o, i2 w" U6 @# b. j5 O
1.0.5%的链霉蛋白酶，PBS配置后过滤分装
( o' c+ v3 m, L% q  配液用的PBS，是调好的PBS直接可以用，还是需要用灭菌PBS，配好备用的PVA-PBS还需要灭菌再用吗；过滤分装的具体操作是什么样的，0.22微米的滤器过滤吗？
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2.胚胎放入抗血清中作用后，用于终止抗体反应的10%血清的PVA-PBS，是指10%豚鼠补体吗？PVA-PBS洗涤后，再次放入含PI、Hoechest33342的豚鼠补体中吗？# Q1 z/ I8 ]& B6 v* g

& \, a) t( |% e& d- ^谢谢前辈的回答

大猪小猪落玉盘

我看用超纯水就可以。祝顺利！

大猪小猪落玉盘

对于第一个问题，最好灭菌处理（自己买盐配的），如果是买的PBS粉末自己配的，过滤器过滤就可以了。不管怎么样，就是保证你实验不受影响就好了。（不灭菌或者过滤也行，一般操作可以，但你是配置溶液，为了长期保存，还是越严格越好）。如果自己实验室没有0.5%的链霉蛋白酶，自己查资料，用实验室的常用盐，自己配个酸性台氏液也可以。但自己要掌握消化透明带的时间。
. y% H+ G5 ~5 V第二个问题：可以不用血清终止反应。但要多洗几遍。但不是用补体。
$ b% c5 E" m4 i: Y7 M+ ?0 C+ L$ l最后一步，可以把两种燃料混入补体中，一起作用。也可以跟补体分开作用。也有人先用PI同补体一起混着用，然后再单独用H33342作用5分钟。以我个人经验，几种方法都可以。

张也行

谢谢各位前辈！