小鼠囊胚细胞差异染色方法

大猪小猪落玉盘

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9 N8 [& w& B+ [; l希望大家一起进步

抹茶跑跑

感谢版主的无私分享

抹茶跑跑

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9 s6 O, ~2 u! B9 s% T! p+ l: r7 D1 \有一个疑问，豚鼠补体（sigma）是冻干粉% K: ]' E6 \! J
“1:10 稀释的豚鼠补体(guinea pig complement) :将1 份体积豚鼠补体和9 份0.1% PVA 的PBS相混合”( A& h) r5 o: p$ j
这里提到的一份体积豚鼠补体，是指冻干粉溶解之后配成的液体吗，豚鼠补体冻干粉标明的是5ml装，冻干粉不是mg而是ml吗？是指要先用5ml液体把冻干粉配成5ml豚鼠补体溶液？/ A  s' ~% P$ F1 |0 x: d
那么冻干粉是用什么溶解呢# L% C! `# D% A  o: ~1 R: J- E

+ |& ?4 O% [3 w$ A1 X% x6 `冻干粉是怎么配的，一份体积指的是什么，有点糊涂

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你说得很对，是要首先配成溶液。我记得我是用PBS稀释的，但我现在不能确定。我记得当时我是按照说明书配的。如果你购买了试剂，应该有说明书，上面一定会告诉你怎么配成溶液的。另附一张我自己做的图片。另外，再给你几篇相关的文章，有论文也有方法，你自己多参考，祝你实验顺利！
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) ^$ o  F2 @6 l2 { many thanks

抹茶跑跑

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之前查过豚鼠补体的说明书（sigma），但是没有找到具体的配置方法，请高手帮忙看下，谢谢

抹茶跑跑

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看了版主的文献，很有帮助- Y8 z: U+ x1 E/ X1 ^
还有些细节，没有找到答案1 D8 G! }+ ^1 w) M
1.0.5%的链霉蛋白酶，PBS配置后过滤分装: \; g1 U1 E0 {/ W/ l+ f/ S
  配液用的PBS，是调好的PBS直接可以用，还是需要用灭菌PBS，配好备用的PVA-PBS还需要灭菌再用吗；过滤分装的具体操作是什么样的，0.22微米的滤器过滤吗？# M) w! e3 T1 c; F% A& h

! D* h2 h+ B' _, T; R2.胚胎放入抗血清中作用后，用于终止抗体反应的10%血清的PVA-PBS，是指10%豚鼠补体吗？PVA-PBS洗涤后，再次放入含PI、Hoechest33342的豚鼠补体中吗？
! j; `6 b" _" ~% |+ k& w' l9 [7 S) z, d% y8 k
谢谢前辈的回答

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我看用超纯水就可以。祝顺利！

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对于第一个问题，最好灭菌处理（自己买盐配的），如果是买的PBS粉末自己配的，过滤器过滤就可以了。不管怎么样，就是保证你实验不受影响就好了。（不灭菌或者过滤也行，一般操作可以，但你是配置溶液，为了长期保存，还是越严格越好）。如果自己实验室没有0.5%的链霉蛋白酶，自己查资料，用实验室的常用盐，自己配个酸性台氏液也可以。但自己要掌握消化透明带的时间。
# E' s7 P0 S: Z第二个问题：可以不用血清终止反应。但要多洗几遍。但不是用补体。
: @: Y. S# P) }  v- O# b7 ?最后一步，可以把两种燃料混入补体中，一起作用。也可以跟补体分开作用。也有人先用PI同补体一起混着用，然后再单独用H33342作用5分钟。以我个人经验，几种方法都可以。

张也行

谢谢各位前辈！