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人脐血间充质干细胞讨论区 [复制链接]

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楼主
发表于 2009-10-8 15:07 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
最近发现做骨髓MSC的战友们很多,也专门开设了一个大家可以共同讨论的空间,但是在脐血MSC方面的帖子就相对较少。虽然脐血并不是MSC丰富的来源,但是相对于骨髓来说,一向遭到废弃的脐血它的来源是十分丰富的,我们可以对它做多方面的研究。也希望版主可以开设一个这样的空间,让大家在上面踊跃发言。
! S: I6 f1 F! P) U) n7 E$ r我是新手中的新手了,也希望前辈们多多指导,谢谢!

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沙发
发表于 2009-10-8 15:08 |只看该作者
脐血确实是个不错的来源,我此前做过这方面的工作,细胞较娇气,需要较高浓度的优质血清及添加剂,国外的相关文献较多,可以参考他们的方法。其实干细胞的来源多种多样,看你对细胞的要求如何而定。骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、外周血干细胞及新近提取的胎盘来源干细胞各有优缺点,我们应根据临床的实际需要而采取不同的种子细胞。

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藤椅
发表于 2009-10-8 15:08 |只看该作者
我们实验室的经验10份脐血里只能有1份长出成纤维细胞并能诱导分化。

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板凳
发表于 2009-10-8 15:08 |只看该作者
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楼上说是成纤维细胞,是否鉴定过啊?是不是成纤维细胞形状的细胞?据说这就是MSC?

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报纸
发表于 2009-10-8 15:08 |只看该作者
上次看到这个讨论区,因为自己的实验还没有出结果,就没敢妄言.现在我可以理直气壮的说:脐血里MSC是存在的!但是分离的成功率不高,我的14份脐血里除2例早产者仅采到14ml排除外,其他的12份都见到贴壁成纤维样细胞,4周左右有2份形成集落,可稳定传代., ~8 N; z$ W* X
目前有一份已传至第九代,细胞生长良好,约3天即可传代.成骨诱导1周,AKP染色结果很好.2 f8 }6 A0 ]( K9 }8 s
现在其他几份还在培养观察中.凭经验应该至少还有4份可以培养出MSC.) v9 x: m% @# N7 {0 s3 ]* l! j
PS:脐血MSC的培养成功率低,耗时较长,对技术要求较高,我在培养过程中积累了一定经验,今天没空细说.感兴趣的朋友可以交流.& o3 |- u- `! P7 {9 i0 J+ M# e
希望把这个脐血讨论区顶起来!
( v& [" r$ T! ^另外二楼的说要高浓度的血清,我没试过,我用的是10%胎牛血清(优质级进口).培养基为a-MEM

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地板
发表于 2009-10-8 15:08 |只看该作者
脐带血来源的MSC比骨髓MSC传代代次更多,我传到15代还能保持非常典型的形态,而且成脂肪、成骨分化功能与第四代没有区别,表型也没有发生明显变化。但明显的是原代培养脐带血来源的MSC比骨髓MSC难,收获量明显少的多。

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发表于 2009-10-8 15:09 |只看该作者
我想请问ven15 脐血MSC在传代时培养基中需要加那些东西除了FBS还要加些什么?还想请问您每份脐血采集多少量?我也准备做这方面的实验,想请教!希望能经常得到您的指导!

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发表于 2009-10-8 15:09 |只看该作者
养这个细胞真的很郁闷,养了40天传了两代,经常换个液细胞就死掉了,不知道什么原因用的是GIBCO的胎牛血清加了bFGF,感觉条件没什么可挑剔的了,细胞长得不好,试验完成遥遥无期,压力非常非常的,迫切期望ven15
/ Z3 }7 [$ V" t9 S% k8 ~+ w战友把经验分享一下!!!

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发表于 2009-10-8 15:09 |只看该作者
只有改善培养条件,细胞才可能长好,原代培养细胞密度要高,不要急于传代,至少达到80%融合才考虑传代.没有其它更好地办法.即使条件优化,也不可能每次培养都获得理想地结果.

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发表于 2009-10-8 15:09 |只看该作者
我想问一下取血时肝素的用量对之后细胞的提取影响大吗?- \! N# N' q3 o* T/ z( g
还有细胞第一次换液大概在什么时候、之后多久换比较好,有经验的帮帮忙把,谢谢
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