人脐血间充质干细胞讨论区

slau

最近发现做骨髓MSC的战友们很多，也专门开设了一个大家可以共同讨论的空间，但是在脐血MSC方面的帖子就相对较少。虽然脐血并不是MSC丰富的来源，但是相对于骨髓来说，一向遭到废弃的脐血它的来源是十分丰富的，我们可以对它做多方面的研究。也希望版主可以开设一个这样的空间，让大家在上面踊跃发言。
- I+ M) ?. N2 X8 S, b+ F. q我是新手中的新手了，也希望前辈们多多指导，谢谢！

slau

脐血确实是个不错的来源，我此前做过这方面的工作，细胞较娇气，需要较高浓度的优质血清及添加剂，国外的相关文献较多，可以参考他们的方法。其实干细胞的来源多种多样，看你对细胞的要求如何而定。骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、外周血干细胞及新近提取的胎盘来源干细胞各有优缺点，我们应根据临床的实际需要而采取不同的种子细胞。

slau

我们实验室的经验10份脐血里只能有1份长出成纤维细胞并能诱导分化。

slau

楼上说是成纤维细胞,是否鉴定过啊?是不是成纤维细胞形状的细胞?据说这就是MSC?

slau

上次看到这个讨论区,因为自己的实验还没有出结果,就没敢妄言.现在我可以理直气壮的说:脐血里MSC是存在的!但是分离的成功率不高,我的14份脐血里除2例早产者仅采到14ml排除外,其他的12份都见到贴壁成纤维样细胞,4周左右有2份形成集落,可稳定传代.
; N! e$ h# C8 [9 X目前有一份已传至第九代,细胞生长良好,约3天即可传代.成骨诱导1周,AKP染色结果很好.$ \: A! q* a. C# M* D5 C! A
现在其他几份还在培养观察中.凭经验应该至少还有4份可以培养出MSC.- Z, `! V. w' y4 B& A
PS:脐血MSC的培养成功率低,耗时较长,对技术要求较高,我在培养过程中积累了一定经验,今天没空细说.感兴趣的朋友可以交流.8 T$ E$ W# o8 e5 C9 L
希望把这个脐血讨论区顶起来!
* ~$ T. V4 {, }- n8 L- \) G( V另外二楼的说要高浓度的血清,我没试过,我用的是10%胎牛血清(优质级进口).培养基为a-MEM

slau

脐带血来源的MSC比骨髓MSC传代代次更多，我传到15代还能保持非常典型的形态，而且成脂肪、成骨分化功能与第四代没有区别，表型也没有发生明显变化。但明显的是原代培养脐带血来源的MSC比骨髓MSC难，收获量明显少的多。

slau

我想请问ven15 脐血MSC在传代时培养基中需要加那些东西除了FBS还要加些什么？还想请问您每份脐血采集多少量？我也准备做这方面的实验，想请教！希望能经常得到您的指导！

slau

养这个细胞真的很郁闷，养了40天传了两代，经常换个液细胞就死掉了，不知道什么原因用的是GIBCO的胎牛血清加了bFGF，感觉条件没什么可挑剔的了，细胞长得不好，试验完成遥遥无期，压力非常非常的，迫切期望ven15
; Z  Z4 w& p+ d3 d3 ], O战友把经验分享一下！！！

slau

只有改善培养条件,细胞才可能长好,原代培养细胞密度要高,不要急于传代,至少达到80%融合才考虑传代.没有其它更好地办法.即使条件优化,也不可能每次培养都获得理想地结果.

slau

我想问一下取血时肝素的用量对之后细胞的提取影响大吗？9 ~5 c) r7 f& E2 x
还有细胞第一次换液大概在什么时候、之后多久换比较好，有经验的帮帮忙把，谢谢