细胞培养问答

细胞卡也

1 冷冻管应如何解冻？
7 u1 p8 S8 w! H( T$ S* G5 M取出冷冻管后， 须立即放入37 °C 水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂。+ c& \1 B0 `) c* D/ e$ ~# q- G6 V
2 细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO？! O; r, {# N: Z
除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
3 i% v. U2 Y; O# A3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？  Y  }" b: F3 h' H
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活。
( t: h1 Y3 p# ~* `+ T4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？$ u% Y3 S% M1 k% `% ]6 X" a
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源， 所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清， 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
# v1 h0 O, H( {4 o' l0 B* `5 何谓FBS, FCS, CS, HS ?5 A( W+ _5 b- ^- C9 Q& s8 X  r
FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum) 是相同的意思， 两者都是指胎牛血清， FCS 乃错误的使用字眼， 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。4 h7 ?" n1 `: q4 U! Y' f  I/ O; z6 J
6 培养细胞时应使用5 % 或10% CO2？或根本没有影响？" R# X$ L; J8 U# ~
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7 g 时，细胞培养时应使用10 % CO2；当培养基中NaHCO3 为每公升1.5 g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞。
: ]) o5 K* q3 K8 H) q7 何时须更换培养基？
7 }6 @. k8 g1 n: B视细胞生长密度而定， 或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。+ R, ^- T% A% J+ o4 T9 s, Q& a
8 培养基中是否须添加抗生素？8 V* f. o! i3 G  B3 _8 e, a
除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。" u$ ], k! \, _2 X, a/ k" W7 {
9 附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA 浓度？应如何处理？
0 |$ I% |) @  u2 F5 @一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4 Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中， 保存于–20 °C，避免反复冷冻解冻造成trypsin 之活性降低， 并可减少污染之机会。