兔间充质干细胞长的特别慢，急！！！

QQ378349500

兔间充质干细胞长的特别慢  原代的时候 差不多2周，传第一代之后，按理说7 8 天就应该到第二代，现在都十四天了，还没有长满，细胞量不是很多。求助原因。
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10%FBS 低糖培养基。  
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同时我也用这个培养基培养软骨细胞，其生长状态比较好。时间差不多 7 天就长满可以传一代。
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大家帮帮忙找找原因。BMSC 到底咋回事呢。

细胞海洋

建议上传图片，更直观

QQ378349500

这是照的图片，感觉不太像 MSC  ，有点像 纤维细胞。大家帮忙看看。  确实长得很慢。   我的培养瓶没有用鼠尾胶处理。不知道提取方法上是不是有问题。

xxzhang83

我们养大鼠的，有时候也会出现这种情况。
* x" P) h* _2 D: T" S1 H6 V兔的细胞可能更脆弱一点吧。
5 v" a$ n1 |- ^; ]0 }/ b是否怀疑支原体感染~~~8 U# g( i/ g8 y+ E: f. C9 N4 w9 X! K
另外我们用透气型的培养瓶确实生长效果比不透气的要好~~

QQ378349500

应该不是支原体污染，我用这个培养基同时养的软骨细胞，没问题。  7天就可以传一代。
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我们养BMSC用的玻璃瓶。 没有用鼠尾胶处理瓶底， 不知道影响不影响贴壁。

zhuanzhuan

你的细胞接种密度是不是很稀呢 太稀的话 间质细胞形态就有所变化哦  你可以试一下密度稍微大点  你用的是什么血清呢    用点好的血清会长得快得多哦  血清如果反复冻融了再用的话其营养成分会丢失的哦

QQ378349500

血清没有反复冻融 ,刚打开的新进口的.  可能接种密度稍微稀了点. 不知道你们接种密度如何. 我之前用80ML体积的 培养瓶, 不大不小那种吧. 一般1:3传 . 或者 1:1传到一个250ML的大瓶中,底面积差不多75cm2，

ziyunfei1982

是低糖DMEM？离心了么？
% v4 U* U3 H( b0 g: L) _& S可以直接抽骨髓，不用离心，贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有：接种密度低，原代取材试验时间长，梯度离心细胞分的太纯。。兔子BMSC长的不如大鼠快，个人经验：玻璃瓶比塑料一次性的瓶子要贴壁好一点

ziyunfei1982

[img][img][/img][/img]

QQ378349500

是低糖DMEM？离心了么？: r7 X. s2 |$ J) }% U
可以直接抽骨髓，不用离心，贴壁24小时后换液。不要洗的太过。长得慢的原因可能有 ...2 {: U& P8 W# L4 ]
ziyunfei1982 发表于 2009-11-29 15:59

" }$ V* g" C/ O' [4 B

5 R) G/ Q7 g0 U  q. u( [抽取的时候离心了，主要是去除脂肪， 1500rpm  10min  也就洗了一次。     3 {2 ~7 c" }/ y- v2 a: S/ ]
7 ]3 T" x8 z& N" M* |8 [
那次是24小时全量换液的。  用的是低糖DMEM 。 兄弟看看那个图片像不像纤维细胞？