请问大家冻细胞的时候是用冻存盒冻的吗？

jiuxuya

另外大家是怎么冻的？直接放冻存盒里放零下80度冰箱里，还是先放4度再放零下80度再放液氮呢？有没有比较标准的冻存方法？

吃呆猫

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) A/ x- i, W' C5 C8 P冻存盒（泡沫盒也可以）可以直接放-80，不用的话就是梯度降温4度半小时，-20度2小时，最后放-80，一天后转液氮。干细胞冻存死的多存活率不高，小心操作。

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子( j! |$ c2 Q) A2 k/ y! ?/ x- \# j/ w
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好的，多谢，请问怎样冻存可以死的少些呢？

ltickp

脐带干细胞 放入程序降温盒后（coolcell）后放-80℃；免疫细胞加bambanker后直接放-80℃ 3 ^. a+ Z# _4 Y; s
没有设备的话就直接 4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃过夜，最后转液氮# }; B: z1 g) O1 C4 Z

吃呆猫

回复 jiuxuya 的帖子9 u8 k  F0 m) q7 V: i4 y  B, \
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好的血清，冻存液9：1，你冻之前细胞的状态，复苏的时候快融，都很重要

jiuxuya

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7 h' e5 o2 {/ A4 x# [; s" `
8 y- E5 `0 P, [" J- W1 J& T请问如果血清我比如我用的是血清替代物已经和培养液进行融合了，那么含有血清的培养液和冻存液DMSO之间的比例是不是就是9:1？换句话说加9ml带血清的培养液再加1毫升DMSO即可？

jiuxuya

回复 ltickp 的帖子1 D; ?; a7 H" G
" a5 H& Y; r" j+ E( X: q8 r
您好既然您说买好的外部冻存液那我问下，一般免疫细胞您冻存是按照冻存液什么密度冻的？5*10的8还是最大1*10的9？另外脐带的冻存是自己配置还是也用免疫细胞的冻存液呢？

卓俊文

预冷冻存盒（含异丙醇）直接-80冻存，第二天即可转液氮。没冻存盒用10层纱布包裹放-80第二天转液氮也ok。

jiuxuya

回复 卓俊文 的帖子& C, R: u$ ^+ a# T& l- L1 M

$ C' M  G, H: @* A好的，谢谢，请问你们冻液氮的时候记录位置是怎么记录的？

吃呆猫

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回复 jiuxuya 的帖子
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" T5 p  i5 i, s2 W( d纯血清（FBS）: DMSO=9:1