请问大家冻细胞的时候是用冻存盒冻的吗？

jiuxuya

另外大家是怎么冻的？直接放冻存盒里放零下80度冰箱里，还是先放4度再放零下80度再放液氮呢？有没有比较标准的冻存方法？

吃呆猫

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/ v& y# R7 h, @: D& C  d冻存盒（泡沫盒也可以）可以直接放-80，不用的话就是梯度降温4度半小时，-20度2小时，最后放-80，一天后转液氮。干细胞冻存死的多存活率不高，小心操作。

jiuxuya

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+ M8 ^5 J0 n# m& ?  G3 k! t; C7 }& r好的，多谢，请问怎样冻存可以死的少些呢？

ltickp

脐带干细胞 放入程序降温盒后（coolcell）后放-80℃；免疫细胞加bambanker后直接放-80℃ : J( F  w' ]9 i! D; W
没有设备的话就直接 4℃ 30min，-20℃ 2h，-80℃过夜，最后转液氮4 ]" H5 V4 W' ]# u$ o+ ?

吃呆猫

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! `3 w( z) M! |% R! `6 M; Q6 R好的血清，冻存液9：1，你冻之前细胞的状态，复苏的时候快融，都很重要

jiuxuya

回复 吃呆猫 的帖子0 g5 a9 j+ v* F% G. x
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请问如果血清我比如我用的是血清替代物已经和培养液进行融合了，那么含有血清的培养液和冻存液DMSO之间的比例是不是就是9:1？换句话说加9ml带血清的培养液再加1毫升DMSO即可？

jiuxuya

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2 y- ?& m. e$ I, [. T) g. J$ a3 F. _+ c
您好既然您说买好的外部冻存液那我问下，一般免疫细胞您冻存是按照冻存液什么密度冻的？5*10的8还是最大1*10的9？另外脐带的冻存是自己配置还是也用免疫细胞的冻存液呢？

卓俊文

预冷冻存盒（含异丙醇）直接-80冻存，第二天即可转液氮。没冻存盒用10层纱布包裹放-80第二天转液氮也ok。

jiuxuya

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& b+ T( d: s. E; j* k好的，谢谢，请问你们冻液氮的时候记录位置是怎么记录的？

吃呆猫

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0 X; l" X2 [8 V' @& {, c& t纯血清（FBS）: DMSO=9:1