求助Invitrogen（Gibco）胶原酶 U与mg之间的换算关系

diablohtj

在消化提取UC-MSC过程中，需要用到 collagenase I型，国内文献一般报到采用0.1%的工作浓度，而国外文献看到用300U/ml。
2 O- z. G4 x) i: Z/ t# m" {* _4 I请问如何配置300U/ml的胶原酶，或者1mg相当于多少U？ （厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml）。

diablohtj

呵呵 没人回答啊，在网上好像没搜到相关资料！

大嘴鳄鱼

楼主自己换算就大约知道了呀。0 u4 x$ x- i8 p6 P. M& `9 b
厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml' k+ h" t! e( f3 ~: S
5 ]+ J# p6 l. T
0.1%=0.1 g/100 ml=100 ug/100 ml=1 ug/ml。也就是1 ug大约是50-100 U。

大嘴鳄鱼

因为胶原酶都是从动物身上提取的，所以在国际单位上不是特别的准，也就是一个近似值。而且，每一批次产品，都有细小的差别。

telomerase

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上等号的吧！

diablohtj

楼主自己换算就大约知道了呀。
4 r# h- X- {7 `/ O# g厂家的说明书上称常用的浓度为0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml3 h4 L) z: k, i6 n' F: ]" ], K

8 Z1 R' Y# N4 Y9 }2 `0.1%=0.1 g/ ...6 f5 u  d+ i) W
大嘴鳄鱼 发表于 2009-12-15 14:31

8 [9 z& A& c2 u2 b( x% T* R
$ v4 C3 f- p$ y3 X: N& f# a# S
0.1%~0.5%或者50U/ml~100U/ml* H2 |3 U. \2 j+ p" V+ F2 p+ O+ h
并不能说明0.1%就对应50U/ml啊，而且找你的算法最后是1mg=50~100U不是1ug。0 @$ L: ~6 S$ g* E2 a4 R' o
# }1 h  X8 N: T$ k! Q, i8 L
0 Z$ ]# N! C9 s) P/ m; `
如果按版主的意思，需要测定活性单位的话，300U/L如何配置和验证呢？

大嘴鳄鱼

U 好像得通过测酶活来确定吧， 胶原酶生物制剂，和化学制剂不一样，U应该每一批都是不同的。很难和质量划上 ...
  a, W: t! H' j3 ntelomerase 发表于 2009-12-15 14:34

+ p9 B7 V7 }" y! ~' q7 \" b
5 M: C& {! K- E( N% P2 T
为了楼主的问题，我特意还查了一下，U确实是每批不同。而且还顺带附上除了胶原酶之外的其他酶单位测定的方法。希望对楼主有提示。& Z1 l/ }0 f; L# c, J
+ q. [5 ]  w) w
Unit Definition, \  y- r6 h8 o6 V8 @
0 N; p4 B4 ]% K! d2 v: M, X6 q
One collagen digestion unit liberates peptides from collagen equivalent in ninhydrin color to 1.0 μmole of leucine in 5 hr at pH 7.4 at 37 °C in the presence of calcium ions.
* r8 q, r) \/ d3 `" ?% v. m2 j6 b; L4 ~9 i) _' C
One FALGPA hydrolysis unit hydrolyzes 1.0 μmole of furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala per min at pH 7.5 at 25 °C in the presence of calcium ions.
$ C- A+ Z0 T4 {3 }
% {$ F. E1 f5 t* N- _One neutral protease unit hydrolyzes casein to produce color equivalent to 1.0 μmole tyrosine per 5 hr at pH 7.5 at 37 °C.2 n5 w) d1 _, v; }- N+ g
1 i$ {7 ]; K/ e
One clostripain unit hydrolyzes 1.0 μmole of BAEE per min at pH 7.6 at 25 °C in the presence of DTT.

大嘴鳄鱼

Sigma有比较详细的测定方式。呵呵，顺便给你附上。
8 B; x3 L/ {5 S7 L' D! X) _  w0 Q. p8 Q4 ~
不过咱们要是想要向IU靠拢，代价还是比较大的，还需要购买反应底物，估计老板不一样答应让你买这个看似不重要的东西。。。。。。。
$ H* p) t, g# E7 }! l
) _! }5 N' K7 N9 X$ J

diablohtj

谢谢，弄懂了含义，测定还是比较麻烦的，还是自己摸条件比较划算啊！

yierlee

搞半天还以为自己在丁香园，崩溃