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293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。# W, ]7 `7 Q8 W* c: @3 q
/ p. K) X8 U$ H- t X! P8 ?
" O4 D- q% I* v2 g5 ?# P2 g. ]7 {: B1 e, y- B+ w# Y1 t
0 v5 Z8 ~" D/ z% K! j+ R4 `
其生长特性为：
, s4 W! { D6 X) v粘附: _* d6 k* d( [- B6 k* D
文献评价 293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。[RF32725]' K9 O$ Y1 c8 J* U: n+ h! V
表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]7 L- l6 ]. ?% N8 I! T
早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端[RF32764]，现已清楚仅含有左端序列。[RF50113]0 G q& S q6 x7 M3 K# w
此细胞系人腺病毒滴度高。! k7 W' n2 Z0 O+ {" ^; u+ P
室温不贴壁，37℃几日后重新贴壁。
- v( S' t5 q! M3 u- Q 表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体. [RF33793]
$ `5 `2 [7 O* r7 u: Z3 E; V The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).8 [1 m( Q! Y' O8 X( j1 n1 H
传代 293:弃培养基，含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗涤，弃去，加1-2ml消化液室温或37℃消化。
+ y! @& ~+ D, G; }$ p# F" k 加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。
* q: l* c' | S! N* F) A 293T:生长快，通常倍增时间不到一天 。每3~4 天1：10至1：20稀释，5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化。) l* B0 Z5 S/ T+ E0 z$ \& E8 T
培养基更换 每2-3天一次* a0 J5 A8 R! f3 ^
冻存液 95%培养基；5%,DMSO；culture medium 95%; DMSO, 5%；0 e" T, I# X- b. U3 \7 O( s: Y
培养条件 ATCC培养基：90%的MEM Eagle，加入2mM L-谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，0.1 mM必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠；10%加热灭活的马血清
+ p7 d4 U/ D" M9 P3 D# G 37℃培养 |
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发表于 2010-1-24 21:49
发表于 2010-1-24 22:36
