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293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。用Ca3(PO4)2转染效率可高达50%。蛋白表达水平高，转染后2-3天用碱性磷酸酶分析可较容易地检测到表达的蛋白。瞬时转染293T细胞是过表达蛋白并获得细胞内及细胞外（分泌的或膜）蛋白的便捷方式。& x8 X+ |7 \6 [7 d7 V# S
/ E( O5 ?! b$ @* Y6 }; U ]( B' g+ w' z/ l8 U
( L/ l, k' A* I- S. ?8 j4 b/ N
; _' j$ t/ b- J. q- N其生长特性为：
8 k0 M8 Q0 U) h( F N2 R7 j: p粘附+ f% B# ^8 k- y4 r5 c1 i
文献评价 293细胞系是原代人胚肾细胞转染5型腺病毒(Ad 5) DNA的永生化细胞。[RF32725]$ X% I9 F$ {, }+ n1 [# J9 x
表达转染的腺病毒5的基因。[RF32725]% O( _2 t# S1 y: i
早期报道认为此细胞含有Ad 5基因组左端和右端[RF32764]，现已清楚仅含有左端序列。[RF50113]! S, X% r4 y; a. ~. t) h6 r! {' d
此细胞系人腺病毒滴度高。* @3 b/ P5 d0 \2 ~0 o2 ^* S
室温不贴壁，37℃几日后重新贴壁。9 L2 l+ n+ _+ `. `) S* |! y
表达由整合素beta-1 亚基与玻基结合素受体 alpha-v 亚基组成的玻基结合素细胞表面受体. [RF33793]
0 R8 Y, P( x" \2 @ The Ad5 insert was cloned and sequenced, and it was determined that a colinear seqment from nts 1 to 4344 is integrated into chromosome 19 (19q13.2).& A/ {0 H4 S: Q: R! H
传代 293:弃培养基，含0.25% 胰酶, 0.03% EDTA 消化液洗涤，弃去，加1-2ml消化液室温或37℃消化。5 y1 v" S8 B7 {4 v5 J
加入新鲜培养基，吸出，分到新培养皿中。一传二至一传四。
) T4 R( r- f8 E' ?4 m% `, D' ~# M 293T:生长快，通常倍增时间不到一天 。每3~4 天1：10至1：20稀释，5% CO2条件下培养。细胞贴壁疏松，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化。
: ?2 Z! \7 {6 K1 C7 g- v 培养基更换 每2-3天一次) c7 G* C' a7 ^& x6 C7 L( A( ~, b
冻存液 95%培养基；5%,DMSO；culture medium 95%; DMSO, 5%；' [/ _6 O/ {# U/ S8 {4 E) g2 M/ b* m- i
培养条件 ATCC培养基：90%的MEM Eagle，加入2mM L-谷氨酰胺，1.5g/L碳酸氢钠，0.1 mM必需氨基酸，1.0 mM 丙酮酸钠；10%加热灭活的马血清1 G7 S% U2 k+ I L7 D
37℃培养 |
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发表于 2010-1-24 21:49
发表于 2010-1-24 22:36
