ips诱导因子问题？

ahfjwangrui

急求：各位专家，请帮帮小弟忙，我想获取产生ips细胞的转录因子基因，但是设计的引物不知道是应该针对mRNA反转的cDNA，还是针对cDNA中的一段即，CDS段，6 N5 E  n3 Y# W2 h& o3 h
我听人说CDS就可以编码蛋白了，做过这方面的专家们，你们是怎么做的？万分谢谢！

ghfvcat

你要做什么用？一般都是CDS 吧，其它辅助序列表达载体上都有的

baichunyu

你设计引物应该这对cDNA，但是你要确定你所扩的序列准确序列，也就是你要确定出这段基因的目的片段，准确的功能区域

ruanyao57

CDS即可，不要poly（A）。

ahfjwangrui

有做过的人吗？你们出来说个话吧，谢谢

ghfvcat

回复 5# ahfjwangrui : R- j4 F  v* W3 U3 Q$ {

3 K7 b" h- N9 x( J$ n8 f' {' g/ G! a3 ^8 e$ D6 `% P: p2 K
    问题是你要做什么用？构建重组病毒，还是做蛋白表达？载体是什么样的，载体上带着什么？

ahfjwangrui

是做蛋白表达的，我的目的要在细胞内表达四种转录因子蛋白

ghfvcat

回复 7# ahfjwangrui + t9 q5 ]+ v4 v/ X( E1 Z1 E
+ G! h- K! |9 T* @% Z" U) t  \

* ^6 C! H8 m+ ~4 s- j9 U    是在真核细胞里面么？用的什么载体啊，cDNA包含编码区，先导序列以及后续序列等，一般的这些表达常用的序列在载体上都是有的，只要把CDS插进去就可以表达了; s$ ?8 s4 Y# ?, d
一点浅见，如有不周之处，还望指正

qizhi502

addgene 上有各种因子质粒

ghfvcat

回复 9# qizhi502 / H: A, y2 Y$ d: x& s3 s

, y8 o- y# W4 D0 m! z; ^" a  W1 v8 N/ q3 A
    版主，你买过么？能不能指教一下购买流程？关键是那个进口许可怎么申请？