请教SD大鼠MSCs的培养

helen841102

SD大鼠的骨髓间充质干细胞的培养应该用什么培养基呢？我看文献有的用DMEM,还有MEM,还有DMEM/F12的，到底用哪种培养基比较好呢？血清的浓度时10%还是15%呢？还有就是消化的时候是消化的时间比较长的如10分钟或更长的是MSCs,还是消化的时间短的如1-2分钟的是MSCs呢？很困惑，望高人指点。

missyoudad

15%吧

可怜的孩子

我们用低糖，10%血清DMEM就可以，细胞长的很好。至于血清，我们用的国产四季青血清也很好，甚至有时ES细胞用这种血清维持培养一段时间，效果也不错，出于好奇，专门试验过。其实，培养皿的质量对细胞的粘附增殖影响也很大的，DMEM的来源，都是一些重要的因素。至于胰酶消化，我习惯用0.1%左右的浓度，37度，消化时间与细胞类型及状态有关，镜下观察，至可吹掉状态，终止消化即可。

illidancui

请问一下是不是高糖和低糖的区别就在于高糖可能会导致msc分化呢？

helen841102

谢谢

franklinhg

培养基一般都是低糖的  血清最好是进口的 毕竟国产的血清还是有差距的  血清浓度一般都是5%-10%  浓度太高容易分化  消化时间其实没有准确的定量  因为胰酶的质量  培养基内血清的残存量  消化的温度  等等 对这个时间都有影响  9 @" S. G& v! n: w' d% k" Q; o
个人意见是以无菌的生理盐水先润洗待消化的细胞 然后加入预热到37度的胰酶 镜下观察细胞开始皱缩就终止 然后吹打成均一悬液  进行后续操作

dragon513

我认为无论是DMEM还是MEM问题不大，只是我也用的是DMEM，但是高糖，血清用过10%和15%，血清含量高细胞长得快，不知道对后期有无不良影响，我还是用的10%，主要更多的用的是10%。消化时间以显微镜下开始变圆为准。

helen841102

谢谢

kqyy

注意污染

liugy04@163.com

可能是血清的问题，换进口血清试试