请教SD大鼠MSCs的培养

helen841102

SD大鼠的骨髓间充质干细胞的培养应该用什么培养基呢？我看文献有的用DMEM,还有MEM,还有DMEM/F12的，到底用哪种培养基比较好呢？血清的浓度时10%还是15%呢？还有就是消化的时候是消化的时间比较长的如10分钟或更长的是MSCs,还是消化的时间短的如1-2分钟的是MSCs呢？很困惑，望高人指点。

angel-sakura

我用的是low G DMEM，10%的血清，消化是0.25%胰蛋白酶不多于3min，一般这个要自己把握，不同实验室应该有点差别。消化得越久对细胞的伤害越大。

碧海蓝天

回复 2# angel-sakura 3 ]: Q* L* {4 i# M# }2 M5 d+ w

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    F12也可以，差别不是太大，关键看你是贴壁培养还是梯度离心加贴壁培养。用梯度离心后细胞比较纯，但细胞也相对少得多。胰酶消化没有固定的时间，必须亲自在镜下观察，看到回缩即终止反应，时间太长对细胞生长状态影响很大。时间过长还可能引起细胞死亡。

helen841102

谢谢 我用的是贴壁培养 培养基是low G DMEM，10%的血清，刚开始细胞贴壁很好 可是换液一两次后，细胞会突然死亡，不知道是什么原因，难道是培养基营养不够？

碧海蓝天

你的培养基用了多长时间了，PH值对不对，要不换用新培养基试试。

liugy04@163.com

可能是血清的问题，换进口血清试试

kqyy

注意污染

helen841102

谢谢

dragon513

我认为无论是DMEM还是MEM问题不大，只是我也用的是DMEM，但是高糖，血清用过10%和15%，血清含量高细胞长得快，不知道对后期有无不良影响，我还是用的10%，主要更多的用的是10%。消化时间以显微镜下开始变圆为准。

franklinhg

培养基一般都是低糖的  血清最好是进口的 毕竟国产的血清还是有差距的  血清浓度一般都是5%-10%  浓度太高容易分化  消化时间其实没有准确的定量  因为胰酶的质量  培养基内血清的残存量  消化的温度  等等 对这个时间都有影响  / R6 F$ u% ^# I
个人意见是以无菌的生理盐水先润洗待消化的细胞 然后加入预热到37度的胰酶 镜下观察细胞开始皱缩就终止 然后吹打成均一悬液  进行后续操作