肿瘤干细胞真的好做吗

hany2007

我现在做博士后，课题方向是胃癌肿瘤干细胞。我对csc的存在一直持存疑态度。做干细胞涉及流式细胞仪分选侧群细胞，我们省就没有一台机器带分选装置。老板的意见是用化疗药物来富集，再就是频繁地做临床样本的原代培养。nod/scid老鼠比较贵，老板目前的方案是用医院的x射线照射普通c57鼠类在免疫缺陷模型。我进站半年了，开始我还很刻苦，可最近这两个月我基本没有再做实验，因为我觉得纯粹是瞎折腾。老板非常固执，我说做信号转导老板说抗体太贵，买美天旎的免疫磁珠做分选是我们实验室目前可行的手段，可老板嫌这种手段没有开创性，标记物都是已知的。老板就想找到一个从未报道过的胃癌干细胞标志物。我那天解剖了一只老鼠，看看胃壁有多厚，天哪，就是普通滤纸那么薄，如此纤薄要做胃癌细胞的正位接种真得需要特殊的技巧，我是越做越没有信心，可心理压力又特别大，整晚睡不着。我们实验室自己建了一个小小的带空气净化装置的细胞间，自从细胞间建成后，我们楼上的好多人都想进来养细胞，老板是个老好人，谁张口他都答应。有些人带进来的细胞本身就是真菌污染，现在细胞房里真菌污染的一塌糊涂，把真菌带进来的人浑然不觉的一代又一代的传，搞得我们的细胞也全都惨不忍睹。说还不好说，毕竟人家不是我们实验室的人。年终了，我越来越没有信心，老板对我也渐渐地失去了耐心，这几日催我出数据，写基金。其实老板是个好人，当初我选择在此做博士后就是源于他的人品，他正直，憨厚，厚道，敬业。但最大的缺点是固执，他并不熟悉肿瘤，现在开干细胞完全是因为肿瘤干细胞领域新，我从来不欺负好人，所以我拿他一点招都没有。万般无奈，我只好求助于论坛，我怯怯地问一声胞吧的战友们，在我实验室现有的条件下，做肿瘤干细胞好做吗！

jiandong2001

确实很困难！

饶冠华

回复 1# hany2007 6 i/ c- a3 U7 e0 }. P6 n

9 n; D4 c% ~, N. y; U4 \嗯 做肿瘤干细胞的确需要耐心 尤其是不顺利的时候。针对你的困难，我可以给你几点建议：/ [1 K5 T; P* d; N: |) a* ^
1. 肿瘤干细胞的富集不必要用化疗药物刺激，原本刚开始原代培养，细胞状态就不稳定，并且很脆弱，如果在强加一些外界刺激，想要获得CSC很难。如果是细胞系你可以用药物去筛选。原代培养的话，你可以先尝试一下能不能分离出相对纯一点的胃癌细胞，在5代~10代之间，你用低粘附板养，富集能形成sphere的肿瘤细胞（一般顺利的话，形成sphere需要15~20天）。然后再扩大培养做其他实验。. P: u( P8 T' J) F  a8 e
2. 现在肿瘤干细胞领域，寻找新的cell surface marker已经不是很好的方向了，况且大家也是半信不信的。我觉得做点耐药性或者生物学性质方面更有意义。
. Y; j  F% c3 D' u+ H% `0 [1 u3. 针对染菌的事情，你必须和老板商量，统一除一次菌，然后未经严格消毒程序不能进入细胞培养间。因为做CSC折腾细胞的周期比较长，所以一定要保持无菌环境，否则基本上不可能成功。
( P, u8 d3 p* t# l1 k4. 生物实验本来就很让人frustration,所以我一直就觉得做生物出身的，如果能忍耐下去，真的是没有过不去的坎。
4 l; K+ b/ s- C, N" I2 w5 D" ]! _+ M; v
bless~~

scienese

支持了说先！！

jiandong2001

现在肿瘤干细胞领域，寻找新的cell surface marker已经不是很好的方向了，况且大家也是半信不信的。我觉得做点耐药性或者生物学性质方面更有意义。
( i  u! r4 x4 X3 U5 O6 F9 K( q% F# O; a, Z2 M
很有道理

wenwen629

回复 1# hany2007 # ]8 k& C0 {0 F2 b' F) T& l
　　作为肿瘤干细胞试验的小菜，不敢乱说，只浅谈自己实验感受．对于肿瘤干细胞，marker未有明显标志的主要是胃和肝癌.癌细胞本来就很复杂,我们对自己培养的胃癌原代细胞系用已报道的标志物做分选,发现不同的细胞系的标志不一样，同一细胞系不同培养代数也不一样．我们头也要我们尝试药物富集肿瘤干细胞，但又担心药物作用是本不稳定的原代细胞系变异；另外一种富集干细胞方法就是反复过小鼠，做成瘤实验．如果你不是要看转移的话，不一定非要做原位，可以做皮下吧？实体瘤转移似乎也可以腹腔注射肯转移．
. o# v# O& V* Q$ B6 \　　另外，做生物的压力都很大，对自己的课题要持坚信的态度去做，要不进行不下去了．真菌可以通过空气转播，污染起来是很恐怖．这种情形可以和实验人员说吧，大家都至少要对自己的实验负责．

foxp3

楼主这样的工作条件做干细胞确实困难啊！做CSC对于money的要求比较高，真要做好不容易！, G+ x/ m( y  ^
饶斑竹提的意见还是很中肯的，你可以先做原代培养，多建一些细胞系，有了自己的细胞系就能出新东西！2 Y3 C" L, O3 f$ ]6 F8 ?3 U- J9 O" l
另外对wenwen629提到的问题，我今天发了一个帖子，提到了即使是同一种肿瘤，CSC也存在很大异质性！因此，是否可以认为，每一个肿瘤都有其独特的CSC，即personalized CSC呢？

yqgong

学习下，正要着手前列腺癌干细胞，还迷茫着呢......
: U$ y* F1 l3 g, [! N8 a5 s需要帮助和指导

Rena

尽大程度的富集肝癌干细胞是我的目标，还未实践，学习中。。。。

lilinfeng

我的情况和你差不多，实验条件很差，类似于全开放的无菌间有十几个学生在养细胞，污染司空见惯，最郁闷的是老板怕花钱，一涉及到买抗体、试剂盒的事，他就要求我保证能出结果才可以买，看来要做实验还要立军令状，郁闷死了！为了省钱，我的研究方案已经更改了数次，看不到希望，怎么出站呀！！