请教脐带干细胞传代后不生长的原因？

wshzhoum

2天前把一瓶P2的脐带间充质干细胞在胰酶0.25%，1ml 在孵育箱中消化1min，然后弃胰酶吹打成悬液，平分至两瓶。。。。昨天观察有一瓶细胞生长及细胞密度都很好，另一瓶却都未贴壁，换液后仍有大量细胞贴附于瓶壁，形态却是圆形。。。。这是什么原因造成的？
3 G3 N# X- Q2 K" l% ~2 S! O      希望高手能指点迷津，两个培养瓶都为新瓶
! P4 y4 i, S" R, e      感激涕零！

孙帅帅

培养条件没有改变而细胞生长却明显变缓、细胞内颗粒明显增多，生长减缓有中毒表现，但是培养液多不发生浑浊，即可考虑支原体污染！

细胞海洋

回复 mania7041 的帖子0 x/ L1 f$ t3 D/ D/ U- _- ]$ A* S

( b% T/ Y! k1 Z/ y你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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mania7041

大侠可不可以仔细说下胰酶消化的过程，我最近被胰酶搞惨了，貌似总是找不到关键点，胰酶消化拍早了有没有影响啊

清影

如果两瓶生长条件一样的话，排除了消化的问题，即使有影响，第二瓶也不会出现目前这种情况。之前接种时有包被瓶子么？包被时间和包被液量都控制的一样么~~

hawkyiger

4 q$ G* ?: W9 t5 R' j$ m

; x- z3 b3 D* ^" c. W; Y我也是养脐带MSC的，请问你是哪里的，方便的话可否交流一下，

yuheng

回复 8# wshzhoum # G7 h4 p$ }" i4 ]' j
! \. E3 ]3 I9 f% M/ B
瓶子用的什么牌子的？还有你是怎么分的？是在一个管里离心完用完全培养液重悬了等分为两份么？

wshzhoum

回复 4# 军医 & @% x. S2 U: a6 D8 a, K
, k, y% r( s; @6 i  ~) P4 t# m

9 F8 k$ n8 d. d( u    一开始也认为是这样。。。今天去观察细胞发现大量漂起。。。已经都死了~

wshzhoum

回复 3# yuheng 4 [1 p" F7 H7 M; k

* N, X$ d6 Y, j. j. C" ]4 w
  q$ ?! K# b7 Z# L/ Q# J    两瓶的生长条件完全一样。。。而且全是新瓶。。。

baichunyu

原因一：可能是胰酶消化时间过长，消化不用在培养箱内，加上胰酶可在显微镜下观察，见细胞变圆即可吹打或拍打培养瓶瓶壁；原因二：如果你一瓶分两瓶，是不是一半保留在原瓶子里，长起来的的是原瓶子的，另外那个没有长？？？