请教脐带干细胞传代后不生长的原因？

wshzhoum

2天前把一瓶P2的脐带间充质干细胞在胰酶0.25%，1ml 在孵育箱中消化1min，然后弃胰酶吹打成悬液，平分至两瓶。。。。昨天观察有一瓶细胞生长及细胞密度都很好，另一瓶却都未贴壁，换液后仍有大量细胞贴附于瓶壁，形态却是圆形。。。。这是什么原因造成的？2 [+ Z( v# x9 o) Q
      希望高手能指点迷津，两个培养瓶都为新瓶9 [" b# G8 h* y3 q, p0 o
      感激涕零！

细胞海洋

建议你上传图片，更直观，大家也更好判断

yuheng

两瓶培养条件完全一样么？

军医

圆形细胞是不是刚贴壁没铺开呀？

碧海蓝天

可能你的胰酶作用时间太长了，估计再长也不会贴壁。下次传的时候不用放到孵箱里，镜下控制时间。

hawkyiger

首先得问一下你这两瓶如果相同操作的话结果不同原因是什么，你是分至两个新瓶中还是一半保留在老瓶中，另一半保留在新瓶中，如果后者的话可能是原因之一。另外MSC开始贴壁是圆形，过一段时间伸展成纺锤形，但还是把图片上传看看较好，比较直观

baichunyu

原因一：可能是胰酶消化时间过长，消化不用在培养箱内，加上胰酶可在显微镜下观察，见细胞变圆即可吹打或拍打培养瓶瓶壁；原因二：如果你一瓶分两瓶，是不是一半保留在原瓶子里，长起来的的是原瓶子的，另外那个没有长？？？

wshzhoum

回复 3# yuheng
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) M+ F, J0 {8 v
    两瓶的生长条件完全一样。。。而且全是新瓶。。。

wshzhoum

回复 4# 军医 $ ]: x. M; F  r/ U/ H7 H' p* X

) g! Z% |# k2 K( h: o' O8 Y. z4 ^/ Z/ E
& R: f6 {3 @' J8 }) a; O) \9 o    一开始也认为是这样。。。今天去观察细胞发现大量漂起。。。已经都死了~

yuheng

回复 8# wshzhoum 4 M% h. a  `3 t" A

" M" O+ @& }0 o% F( E+ t瓶子用的什么牌子的？还有你是怎么分的？是在一个管里离心完用完全培养液重悬了等分为两份么？