FACS，双标记问题

bffgbgff

做FACS,直接标记法做双标记的话，应该如何设置对照？

yuheng

一般要设两个补偿和一个双同型对照

yuheng

至于补偿如何设置，这篇文献说的很清楚

luckyfool

有同样的困惑

Hongwu

好好看看，要做此方面的实验

namulow

求脂肪干细胞成骨标记方法

catheryne

以FITC-CD4和PE-CD8为例：对照管一般设三管：
7 m5 }0 I; d7 Z  m, B4 n第一管：FITC-IgG和PE-IgG，阴性和阳性细胞分群# U! l) A5 _( i6 p8 M& s" s+ s
第二管：FITC-CD4和PE-IgG，调PE-FITC补偿! G/ b0 G! y; l5 S) y
第三管：FITC-IgG和PE-CD8，调FITC-PE补偿
- `* `. s, |) t. x+ d1 A+ Z. p  Z检测管：FITC-CD4和PE-CD8双标

gandanxiaoyang

流式结果的好坏以及可信度与对照的设置关系密切。
2 s4 Y9 S/ C' p% J/ q! }& m1 `一般说来，空白对照（即空细胞）是必须的，另外直接标记抗体必须有同型对照，间接标记的抗体至少需要只加荧光二抗的对照。: @" G3 n6 I! W
多色标记的实验，尤其是一根激光器激发的荧光抗体（如FITC与PE或PI双标）,必须各做一管单独标记，因为需要调节补偿。
( q0 G, T8 C  K4 ~0 |/ ]! X如果不同激光器激发的荧光（如FITC和APC双标），细胞数量不多时可以不做单标组对照，因为基本不需要调节补偿。. }2 A4 T9 F% O7 K
但严格的实验，空白对照，同型对照，单标对照是需要的。只有这样，流式的结果才是可信的。