乳腺癌干细胞微球培养问题，新手

caughf

       我在用MCF-7细胞系培养乳腺癌干细胞微球时，文献报道5000个每孔的密度接种到超低粘附六孔板中，所以了获得单细胞需要对癌细胞进行消化，然后再接种到超低粘附六孔板中无血清培养，但终止消化时需要加入含血清的培养基的，这样一来细胞中不就有了血清吗，这怎么处理呢？
4 @; d: _8 }, V  w      我的想法是: `5 w  U' M' V/ I
1、胰酶消化后，加入含血清培养基终止消化，然后离心，获得细胞沉淀。
" N( @* M1 r; q3 U  Q; ]0 K$ k2、接着用PBS清洗、重悬细胞。; ?7 W$ p* P; _
3、再次离心，获得细胞沉淀，去除pbs上清液，
3 z2 E$ j0 C% t3 T4、用无血清的干细胞培养基重悬细胞，计数，最后调整密度，接种。! q1 H5 n- b& I5 E. [; s
     哪位前辈指点一下，这样可行吗？主要是二次离心后，细胞会不会损伤？或者有没有更好的办法？

奇幻雪蓝

二次离心，肯定会损伤的。不过可以降低离心速度或时间来减小损伤程度。这个没有万全之策，只有利益的平衡！, e2 K& L1 j/ s/ H" E( u* N
希望可以帮上你！祝你试验成功！

caughf

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& {. @9 i' O% S. ^! z8 f$ D/ P; D$ r% W/ O$ Y
奇幻雪蓝，也做癌干细胞吗？我用的离心速度是800r/min，离心3min。你们有么有更好的方法，避免因清洗血清而二次重悬离心呢

wxl87

gibco有一种胰酶替代物TrypLE，消化后不需要血清终止，只需要大体积的稀释就可以。这个 可以解决你的无血清问题。相关的知识可以去thermo官网查询。

caughf

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& }. X, n+ w! R3 H' q" }3 u# Z" D
谢谢了，

奇幻雪蓝

回复 caughf 的帖子* P: D5 y8 l. w9 B

, i! ?. x/ o& O! j  p6 c" r# w调整速度和时间，好不好，自己确定！