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本帖最后由 细胞海洋 于 2010-3-13 19:43 编辑 这是分享丁香园里高手的传代protocol，我也按照他的方法做了，效果不错，大家共分享。4 u |! r6 V1 }1 E
培养基DMEM/F12+EGF 20ng/mL +bFGF 20ng/mL +1%双抗，推荐用的消化酶是Accutase(sigma)，传代的神经球大小的上下限是200~300um
# {2 c0 a! }. U2：室温800rpm离心3分钟。
! N X2 c$ ]% E2 T4 R3：去除培养基，保留（或重新添加）150~200uL，重悬。
7 `1 M# Y& k8 E1 P. D& n以下步骤可选：6 \4 Y7 O$ i9 Y5 C7 F% y
4：加入~1mL胰酶或Accutase，重悬细胞。! T6 R3 l% A4 ^. q/ W& d
5：置于孵箱，消化5分钟。, _4 @2 g1 |3 W9 v
6：室温800rpm离心3分钟。1 F. F2 G- A; l# v5 z) e
7：以150~200uL培养基重悬。" _+ ^2 Z. J% l/ v, Q' t2 L( w- s8 I
8：（上接步骤3或7）
+ ^" d, K3 {7 h" ?以枪和枪头在离心管中对小体积的悬液进行连继吹打，吹打次数以球的大小和个人经验而定，我对如上述大小的球一般吹打30~50次。
- {( H `3 }$ B! U( n/ h; r4 c$ z& U（这是整个过程最重要步骤。（1）注意无菌操作，枪头高压，枪在使用前用酒精棉擦一下，在超净台内紫外照一会儿。（2）吹打时，枪头抵住管底，以获得最大剪切力。（3）吹打动作要果断，每次吸入要满量程，但注意动作也不能过猛。
! G+ x- K- X2 R9：
; T. l/ d# o$ n. e1 }2 v接种至新培养皿，培养。 |
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发表于 2010-3-5 10:48
