请问Hela细胞该如何养呢

shihuijunm

hela细胞的培养条件为:
3 e0 j+ O7 F& y5 b# j5 d高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;（培养液DMEM培养基，含10% FCS，100U /ml青霉素及100μg/ml链霉素，于37℃，5%CO2孵箱内培养）下生长就很好,详细可以参照司徒镇强主编的《细胞培养》。9 J( t9 F4 U4 \0 n; r6 e+ M' g4 w
传代步骤: 1．倒去细胞培养液(对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出) 9 ]6 Y: T. T9 I, h2 x! P9 m
2．吸取适量的PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分,
' ~+ M! D2 l0 h利于胰酶消化
/ F% M, ]" J' }+ h/ |3．加入适量0.25%胰蛋白酶（一般100mm培养皿可加入1ml，15cm培养瓶加入5-8滴）转动培养瓶，使其湿润整个细胞房，高温下消化2-3分钟。
$ k$ i  V) o5 {, f9 b2 z& Z翻转培养瓶，肉眼观察细胞单层，见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液，如消化程度不够可延长消化时间，或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落，已消化过头，则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作
/ w+ s8 c" _  _. b* W% t3 |4．加入适量培养液终止消化) Y# z% ?' L$ K. _8 v9 _
吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层，至全部冲下轻轻吹打，混匀，成细胞悬液取样计数，调整细胞浓度为5′10 /ml 6 c( i9 f! O+ s& I3 C( b- O4 o
15cm培养瓶培养时，吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中，加入4ml培养液，盖好,置37°C孵箱中培养。3 p: n; m+ Q; U6 ]  t" H
传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞,注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期:
, p6 C# e  z4 Z' B4 s游离期
3 ~& ]* C7 w" x细胞经消化分散后，由于愿生质收缩及细胞弹性，细胞成圆形，折光性强，呈悬浮状态。0 k; a  j, S9 ]
吸附期4 M# I& r! F) m( p2 m2 {' e
接种24小时后，由于细胞的附壁特性，开始贴壁，圆形细胞变成延展状态。
1 Y+ l6 v' }# y4 ~7 b: Y4 v繁殖期5 e/ ?% U! V! V) |# P2 T/ V
细胞快速生长、分裂，形成细胞岛直至细胞单层。
  u- L$ i* |% @: L$ B, [4 A  H维持期
. H- ?' f% j' @. I# {  ?4 ^0 `细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱，细胞内颗粒增多，由于代谢物的积累，CO2增多，培养液变黄。& g7 ~. y# e* E  G
衰退期* \: I2 Z# |/ N7 E% j
如不及时换液和传代，由于营养缺乏、代谢物积累，细胞内颗粒进一步增多,立体感差，细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。$ s/ c: V* c% B! M
应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.