大家谈谈你们是怎么培养ES细胞的？

runner

刚接触ES的培养2 L% j$ r1 Y, S0 F% T
新实验室规定MEF和ES每天都要换液，而且消化的时候要37度消化满5分钟
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4 C( q( n( a+ P我以前养其他细胞的时候，一般都是隔2～3天才换一次液的，细胞消化也很快，基本上室温几十秒到两三分钟就消化下来了。
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请问大家，有必要每天都换液，每次消化都要满5分钟吗？（肉眼观察3分钟细胞已经成片脱落下来了，很担心会消化过头）

decloud2009

隔天换液可以的，，消化也不一定要5 分钟。只要看到脱落了，镜下也脱落下来就可以了阿 。干吗一定要这么死啊。。

BenHantun

我觉得培养ESC，勤换液还是比较好的，但是消化细胞，还是自己掌握时间吧，只要镜子下看到绝大部分细胞消化下去就可以了，消化时间长反而对细胞不好！

czzhaozhu

从我培养mES细胞和hES细胞的一点经验来看，还是每天换液对细胞的生长状态好，最好每天都在固定的时间换；至于消化时间倒不是非要5分钟不可，只要细胞从皿底大部分脱落下来即可。

chendongbo338

你们细胞如果消化5分钟，细胞状态还好吗？
2 J8 M6 _9 V( @我消化R1细胞一般只有在室温消化1分钟，细胞开始脱落，没必要那样死板，消化的过程中可以看一下细胞是否脱落，再决定是否继续消化，最好在消化前用PBS洗两遍

wuhonglian2008

我个人养ESC也是每天都换液的，但MEF一般两天换一次依情况而定，消化我一般放在培养箱2分钟拿出来看看，根据具体情况在决定是终止还是继续消化！

开心果王

可以根据细胞的生长情况来决定哦，向ES这些都是比较娇贵的细胞，应该用低浓度的胰酶/EDTA（0.05%）来消化，时间不要太长，1min左右！显微镜下观察，大部分消化下来即可，终止的时候用培养液轻轻吹吹即可！

栀子花开

回复 1# runner , M( d, M2 T: N4 r2 g3 A

, K% M9 R; D7 |1 V5 m
; k. W2 M/ u: i    消化这个步骤不能把时间定死了吧，应该是要在显微镜下观察，就像上面同仁说的，有多数细胞脱落即可，此时你稍微轻轻摇晃下，其他细胞即可脱落。9 k/ p- P  E' F' V# N2 A2 e" ~
消化时间太长，确实不利于细胞的生长啊！$ K4 V" S1 B% I) O! Q
不知道说的有没有道理

niyou

回复楼主：
# }3 y8 Y( B" b+ u0 i# _9 I我做胚胎干细胞培养（mES）已有六年。我谈一下经验：
0 U3 K; h. w% X$ a1、最好每天都换液，最好每天都在固定的时间换；
5 s% w* a7 \" n5 Z2、用0.05%的胰酶（Gibco,含0.02% EDTA）消化30秒-2分钟，其实1分钟足够，关键是提前将细胞用37度预温的PBS洗1－2次，加入已37度预温好的胰酶，效果很好。消化时最好在显微镜下观察，有多数细胞脱落即可。

旺旺

我也是每天换液，基本固定时间，