我一直做胚胎干细胞转染方面的实验，但转染效率很低，请教大侠们的高招！

blue11sea

5 W+ u( o1 W- k& T6 y, x' w3 X
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我一直做胚胎干细胞转染方面的实验，但转染效率很低，请教大侠们的高招！

ppcl2

用电转，加puromycin筛。

nhzxcsc

现在文献报道的转染效果好像都不是特别好吧，可以多种方法都去试试

cony

回复 2# ppcl2
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9 }& D* c2 y5 \/ o; `
    你们用电转效率大概是多少？

ruofan1982

我也是用的电转，一96孔板一般都能筛到几个阳性克隆，
6 P0 u$ D& o7 y, G5 P不过有的载体确实不好做，可能和载体本身有关

farmer

回复 5# ruofan1982 ! d+ p9 O# \0 I5 i' U

  j! Z, |7 h+ E; v( o  I7 L. k2 t, r  O* H7 q1 g$ B: [) }
    学习一下。

gh2010

我现在在试电转，乳腺干细胞转染绿色荧光，24小时一个孔就2个有荧光，但36h时有7-8个，可能电转以后的48h应该是细胞的恢复期，我打算48h以后加puromycin, 希望能多点阳性克隆~~~

yangqiurui

人胚胎干细胞转染效率低于鼠胚胎干细胞，也不知你说得是哪个物种的胚胎干细胞。

echowdk

回复 gh2010 的帖子! t+ j9 J- d/ e' p) W+ Q& K
0 p) D5 a6 _; u2 L
用什么试剂啊，lipo吗？试试悬浮转染的方法。

gh2010

回复 echowdk 的帖子
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电转，invitrogen的电转仪和试剂:suspension buffer和电解液,就是现在电转参数还没有优化，我的细胞是悬浮的，而且sorting以后得到的干细胞不多，努力优化中。。。。